人HPPCn重组蛋白可溶性表达及其增殖活性检测

HPPCn是一种新的肝细胞刺激因子,获得较高纯度的具有生物活性的HPPCn蛋白对研究其生物学功能具有重要意义。HPPCn在重组质粒PET-24a(+)/HPPCn中,诱导表达产物主要以包涵体形式为主。为优化表达条件,运用冷休克表达载体pColdⅡ和无缝克隆技术获得重组质粒pColdⅡ/HPPCn,分别对诱导温度、时间、分子伴侣等诱导条件进行筛选,镍离子柱亲和层析纯化,Western blot分析目的蛋白特异性,不同浓度人HPPCn重组蛋白(0、10、100ng/ml)刺激SMMC7721细胞,免疫细胞化学方法测定Brdu掺入、PCNA表达变化。目的蛋白在培养温度为16℃,终浓度为0.1mmol/L的IPTG过夜诱导时为可溶性表达,最终得到人重组HPPCn蛋白纯度为94.88%,人HPPCn重组蛋白可刺激SMMC7721细胞Brdu掺入增加、PCNA表达水平上调,其刺激作用具有量效关系。通过冷休克表达系统获得可溶性表达的人重组HPPCn蛋白,其具有促进SMMC7721细胞增殖的生物学功能,为深入研究HPPCn的作用机制提供了技术条件。     

当归多糖对免疫细胞增殖作用的实验研究

探讨当归多糖对免疫细胞的直接和间接作用。用MTT法分别检测当归多糖(PCA)对PBMC的直接作用、PCAPBMC培养液对PBMC的间接作用;用流式细胞术检测PCA作用于健康人PBMC后各种免疫细胞表型的改变;检测PCA注射BALB／c小鼠后脾细胞增殖变化和巨噬细胞的吞噬能力。当归多糖对PBMC具有直接的抑制作用,而当归多糖PBMC培养液可促进PBMC增殖。PCA注射BALB／c小鼠后脾细胞增殖能力和巨噬细胞吞噬能力均得到了不同程度的增强。研究结果为进一步阐明当归多糖的免疫机理提供了理论依据。