人类线粒体肌酸激酶uMtCK的底物结合位点分析

研究人类线粒体肌酸激酶u Mt CK的结合位点,将其与底物肌酸和ATP结合有关的关键氨基酸进行突变,并对突变体进行酶动力学和圆二色谱数据分析,探讨这些关键氨基酸在底物识别和催化过程中的作用。结果显示,与野生酶相比,突变体Q313A和R336A的K_m~(Cr)分别提高了2.6和2.9倍,k_(cat)下降了19%和55%;同样地,与ATP结合相关的突变体R125A和R287A分别使得K_m~(ATP)升高了3.2和4.2,k_(cat)下降了72%和38%。以上结果表明突变体R125A、R287A、Q313A和R336A影响对底物的结合,同时也降低了酶促反应的速度。利用圆二色谱比较野生酶与不同突变体的二级结构并无明显变化,但进一步的结构模拟表明底物结合位点氨基酸在与底物之间的氢键对底物的识别和酶催化过程中发挥着重要作用。     

重组人过氧化物还原酶-5通过诱导巨噬细胞极化提高抗肿瘤免疫

肿瘤细胞能够采用不同的策略抑制人体免疫系统，使其不能正常杀伤肿瘤细胞。前期研究表明，重组人过氧化物还原酶-5 (human peroxiredoxin-5, hPRDX5)能够激活机体正常的抗肿瘤免疫反应，从而控制与清除肿瘤，然而，其确切的作用机制仍有待深入研究。本研究旨在探讨hPRDX5是否通过激活或者逆转小鼠巨噬细胞RAW264.7的极化状态，从而发挥其抗肿瘤活性。CCK8法检测结果显示，与对照组相比，不同剂量hPRDX5均能显著增强巨噬细胞活力(P<0.001);一氧化氮(nitric oxide, NO)检测试剂盒检测结果显示，hPRDX5显著增强RAW264.7细胞NO分泌水平(P<0.001);ELISA检测结果揭示，hPRDX5促进RAW264.7细胞TNF-α (P<0.01)和IL-6 (P<0.001)的分泌；流式细胞术结果揭示，hPRDX5能够升高RAW264.7细胞抗原分化簇(cluster of differentiation, CD) 80 (P<0.01)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide sy...     

来源于Bacillus sp. AR9 D-海因酶半理性设计的研究

D-对羟基苯甘氨酸是一种重要的精细化工品，在制药行业具有广泛的应用前景。酶法是生产D-对羟基苯甘氨酸的主要手段，但由于缺乏高催化效率的酶而限制了D-对羟基苯甘氨酸的生产。为了提高来自Bacillus sp. AR9的D-海因酶（HYD）的催化效率，进而提高D-对羟基苯甘氨酸的产量，对HYD的底物结合通道进行分析，选取底物通道瓶颈处的氨基酸进行饱和突变和筛选，以提高HYD的催化效率。结果显示，突变体F159S、F159A和F65V的活性相较于野生型HYD分别提高了51%、40%和17%，通过对突变体F65V、F159S和双位点突变F65V/F159S的酶动力学研究发现，突变体的Km值基本与野生型HYD相似，而kcat是野生型HYD的1.3、1.9和2.0倍，最终双位点突变F65V/F159S的催化效率kcat/Km是野生型HYD的2.4倍。高催化效率突变体的获得，以及对突变体动力学的分析，对酶法制备D-对羟基苯甘氨酸具有重要的研究意义和应用价值。