猪肾果糖1,6-二磷酸酯酶N-端60肽的溶液构象

猪肾果糖1,6-二磷酸酯酶N-端60个氨基酸是结合AMP的别构部位的重要组成部分.这一段肽在天然酶中具有2段α-螺旋,不含β-折叠,螺旋含量占这段肽的60%左右.经枯草杆菌蛋白酶对果糖1,6-二磷酸酯酶限制性酶解可以专一地作用在这一位点.得到S-肽和S-蛋白,虽然S-肽与S-蛋白的肽键已经分开,但是它们依然缔合在酶的4个亚基之中.在9%的甲酸溶液中,用SephadexG-75柱(1.3×195cm)可以把S-肽与S-蛋白分开.除去甲酸后,用CD测定二级结构表明,S-肽有30%的α-螺旋和38.5%的转角或类似转角的二级结构,没有β-折叠.蛋白质的生物合成是从N-端开始向C-端延伸,新生肽在生物合成的过程中,它的构象由一级结构决定它自发形成某种结构的趋势,但是,其它部分的相互作用可以在较大程度上改变它的结构,使它最后形成天然状态的空间构象.用6mol/L盐酸胍破坏S-肽链的溶液构象,然后逐步透析去掉盐酸胍,重新测定CD的数值,所得结果与胍变性前的二级结构含量相同,用加入乙醇,环己烷,少量十二烷基磺酸钠等扰动方法都不能增加α-螺旋的含量.相反,随着加入量的增加,有序结构减少,说明当S-肽从酶上被分离下来后,在水溶液中只能形成其在该天然酶蛋白中的一半的螺旋,而另一半却变成转角或类似转角的有序结构的结果并不是由于分离过程产生的假象.     

Conformation of 60-residue peptide fragment from N-terminal of porcine kidney fructose 1,6-bisphosphatase

Limited digestion of fructose 1,6-bisphosphatase with subtilisin produces an S-peptide with an about 60-residue peptide fragment that is non-covalently associated with the enzyme. The 60-residue peptide fragment con-sists of the most part of allosteric site for AMP binding. It could be separated from S-protein by gel filtration with a Sephadex G-75 column equilibrated with 9% formic acid. According to X-ray diffraction results the S-peptide consists of two α-helices without β-strand and the α-helix content is about 60% in the 60-residue-peptide fragment. When the enzyme is subjected to limited proteolysis with subtilisin, the secondary structure of the enzyme does not show a de-tectable change in CD spectrum. The CD spectra of the isolated S-peptide were measured under different concentra-tions. In the absence of GuHCl, S-peptide had 30% a-helix and 38.5% turn-like structure but had no β-strand, sug-gesting that the N-terminal 60-residue fragment, which is synthesized initially by ribosome, would fo     

我国首见斑替支孢瓶霉引起脑脓肿1例

目的报道1例斑替支孢瓶霉引起脑脓肿。方法抽取脑脓液作直接镜检和真菌培养,分离菌株行DNA序列分析、KOH耐受试验、温度试验和明胶液化试验。结果脑脓液直接镜检发现大量棕色、分隔或不规则膨胀菌丝,SDA培养出灰黑色、绒状、纽扣样菌落,微量培养可见棕色、单支或分支特长的孢子链结构,DNA序列分析属于斑替支孢瓶霉。菌株具有耐碱性,不能液化明胶,可在25-42℃环境下生长。脓肿穿刺术、两性霉素B脂质体静脉滴注和脓腔内注射等治疗无明显疗效,放弃治疗后死亡。结论根据其形态学特点和DNA序列分析,菌株被鉴定为斑替支孢瓶霉。该菌引起的脑脓肿为国内首例报道,脓肿穿刺术和单用两性霉素B治疗无明显疗效。     

从三尖杉中分得柯伊利素

据文献[4,6]报道,自三尖杉(Cephalotaxus fortunei Hook.f.)中分得多种黄酮类化合物,其中多为双黄酮化合物,而Plouvier等和马广恩等则自其中分得黄酮洋芹素(apigenin)。我们从三尖杉的树干、树枝、树皮的混合粉末中分得柯伊利素(chrysoeiol)。该化合物为已知的,最早为Tutin等从Eridictyon glutinsun中分离得到。但从三尖杉中分离柯伊利素,尚未见文献报道。