LC-MS/MS测定小鼠血浆中多靶点抗AD bis-MEP-乙二酰胺杂合物ZLA浓度及药动学研究

目的:建立检测小鼠血浆内新型多靶点抗阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)药物双美普他酚-乙二酰胺杂合物(ZLA)浓度的高效液相色谱-质谱联用法(LC-MS/MS),并研究其在小鼠体内的药代动力学。方法:样品经甲醇沉淀去蛋白,应用Waters Xbridge C18色谱柱(2.1×100 mm,3.5μm),以甲醇-水(含5 m M甲酸铵,p H 9.8)(85:15,v/v)为流动相,流速0.25 m L/min;采用电喷雾(ESI)离子源,选择正离子模式多反应监测,待测物分别为m/z 304.3→107.0(ZLA)和m/z 621.7→232.1(内标)。分别给予KM小鼠腹腔和尾静脉注射ZLA 5mg/kg,不同时间点采集血浆用于ZLA定量分析。结果:ZLA和内标保留时间分别为3.2 min和2.5 min。血浆中ZLA线性范围为1-1000 ng/m L。血浆中提取回收率超过91%,日内和日间精密度RSD均小于6%。药动学研究结果显示,腹腔注射时ZLA可快速分布到血浆中,在10.2 min达到峰值,且能达到良好的生物利用度(47.6%)。结论:本研究建立的ZLA血药浓度测定方法快速、灵敏,特异性好,并成功应用于小鼠血浆中ZLA的药代动力学研究。本研究资料将为ZLA在AD治疗中的进一步临床前评估提供依据。     

Abeta-Cu 复合物与Abeta纤丝对小胶质细胞激活作用比较研究

目的：比较具有氧化还原活性的过渡金属离子Cu2+(Cu)诱导形成的A茁聚集物（Aβ-Cu 复合物）与Aβ自聚集形成的纤丝 （Fibrillar Aβ, fAβ）对小胶质细胞激活作用的差异。方法：制备Aβ-Cu复合物和fAβ,利用小鼠BV-2 小胶质细胞株,分别以不同浓 度的Aβ-Cu 复合物和fAβ于37 ℃刺激24 h,检测细胞上清液中的TNF-α（Tumor necrosis factor-α）、NO（Nitric oxide）以及H2O2 （Hydrogen Peroxide）的含量。分别收集Aβ-Cu复合物和fA茁作用24 h 后的大鼠原代小胶质细胞条件培养液,通过观察该条件培 养液对大鼠原代海马神经元细胞活力的影响,评价小胶质细胞介导的间接神经元毒性。结果：（1）在不引起直接神经毒性剂量 （2.5 uM）下,Aβ-Cu 复合物激活小胶质细胞释放TNF-alpha（P<0.01）、NO（P<0.05）以及H2O2（P<0.05）的作用强于fAβ。（2）在此剂量 下,A茁-Cu 复合物通过激活小胶质细胞引起的间接神经元毒性强于fAβ（P<0.05）。结论：与fAβ相比,非神经毒性剂量的Aβ-Cu 复合物对于小胶质细胞具有更强的激活作用,并由此引发更为明显的神经元毒性。