Ubc9融合表达时SUMO化修饰影响蛋白激酶Cθ在免疫突触的聚集

SUMO化修饰具有广泛的功能,包括调控神经突触的形成和传递。神经突触和免疫突触共享某些特性,而蛋白激酶Cθ(protein kinase Cθ,PKCθ)是蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)家族中唯一能在抗原刺激后定位于免疫突触中央超分子活化簇的一员。为了探讨SUMO化修饰对免疫突触的影响,该文采用"Ubc9融合介导的SUMO化修饰系统(Ubc9 fusion-directed SUMOylation system,UFDS)"方法检测Ubc9-PKCθ与SUMO的相互作用;应用体外定点突变技术构建多个SUMO化修饰位点突变的Ubc9-PKCθ;通过荧光显微镜观察Raji B-Jurkat T细胞之间的接触面。结果显示,Ubc9-PKCθ能被SUMO化修饰,且抗原刺激后能在免疫突触聚集;而当多个SUMO化修饰位点突变后,Ubc9-PKCθ的SUMO化水平显著下调,抗原刺激后虽然还是被招募到免疫突触上,但呈现弥散状态。综上所述,Ubc9融合表达时SUMO化修饰影响PKCθ在免疫突触的聚集。     

以技术为主线开设药学类专业微生物学综合实验

以技术为主线开设药学类专业微生物学综合实验,能够帮助药学专业的学生更好地掌握微生物最基本的操作技能,了解微生物实验的基本流程,加深对微生物知识的理解,增强学习兴趣和创新能力,培养出药学微生物生产实践、教学科研全面的人才。     

UFDS系统检测蛋白质SUMO化修饰研究

为了验证UFDS系统（Ubc9 fusion-directed sumoylation, UFDS）是否能够检测蛋白质SUMO(small ubiquitin-related modifier)化修饰,构建了Ubc9和PKCθ的融合表达载体,与SUMO1表达载体共转染293T细胞,通过免疫共沉淀和Western印迹检测Ubc9-PKCθ与SUMO1的相互作用。 结果表明,Ubc9-PKCθ与SUMO1相互作用,且SENP1共表达时导致Ubc9-PKCθ去SUMO化修饰;相较于野生型Ubc9-PKCθ,SUMO化修饰位点突变型Ubc9-PKCθ与SUMO1的相互作用显著减弱;而相较于野生型PKCθ,SUMO化修饰位点突变型PKCθ与SUMO1的相互作用则完全检测不到。 研究结果说明,应用UFDS系统能检测蛋白质的SUMO化修饰,但在鉴定潜在的SUMO化修饰位点时有一定的缺陷。     

人白细胞介素12(hIL\|12)基因在杆状病毒表达载体系统中的表达

人白细胞介素12(hIL-12)是细胞介导免疫发生的关键调节因子,也是目前发现的唯一的异源二聚体细胞因子,由P35和P40两个亚基经二硫键连接而成.利用DNA重组技术,分别构建了含hIL-12p35基因和p40基因的重组转移载体质粒pAcAB3-p35和pAcAB3-p40.将两个重组转移载体分别与致死缺陷型线性化苜蓿丫纹液蛾核型多角体病毒(AcNPVBaculoGold LinearizedBaculovirus)基因DNA共转染昆虫细胞,构建出遗传稳定的重组病毒AcNPV-OCC-hIL-12(p35)与AcNPV-OCC——hIL-12(p40).将两种病毒分别感染Sf9细胞,取细胞培养物上清和细胞裂解物上清进行SDS-PAGE和Western blot检测,结果显示hIL-12p35和p40两基因均在昆虫细胞中获得表达,且能分泌至胞外.表达产物具有免疫原性.     

一种构建重组杆状病毒的简易方法

对传统构建重组杆状病毒的方法作了如下改进：先用磷酸钙共沉淀法单独将质粒DNA转进昆虫Sf细胞中,其中重组质粒采用聚乙二醇沉淀法纯化,12～24h后再用低剂量的病毒攻击细胞．改进后的方法简便、省时、经济、重组率高,适于一般实验室使用．     

薏米黄酒对机体免疫及肠道功能的调节作用研究

目的：考察薏米黄酒对机体免疫和肠道功能的调节作用。方法：将ICR小鼠随机分为3组：对照组、模型组和给药组。首先对模型组和给药组注射环磷酰胺造模,0.15 ml/d/只,连续3d,第4d开始对照组和模型组灌胃生理盐水0.3 ml/d/只,给药组灌胃薏米黄酒0.3 ml/d/只,连续灌胃14d。第1、4、18d对各组小鼠称重;第18d处死小鼠解剖取脾脏、胸腺称重并计算脏器系数;取肠道内容物做肠道微生物培养。结果：薏米黄酒与小鼠的体重变化无关;给药组脾脏系数高于对照组有统计学意义（P〈0.05）,胸腺系数高于对照组和模型组均有统计学意义（P〈0.05）;给药组细菌总数、大肠杆菌数和乳酸菌数高于模型组和对照组且有显著统计学意义（P〈0.01）,真菌数量低于模型组和对照组有统计学意义（P〈0.05）。结论：该薏米黄酒对机体免疫和肠道功能有一定的调节作用。     

以技术为主线开设药学类专业微生物学综合实验

以技术为主线开设药学类专业微生物学综合实验,能够帮助药学专业的学生更好地掌握微生物最基本的操作技能,了解微生物实验的基本流程,加深对微生物知识的理解,增强学习兴趣和创新能力,培养出药学微生物生产实践、教学科研全面的人才。     

薏米黄酒对机体免疫及肠道功能的调节作用研究

目的:考察薏米黄酒对机体免疫和肠道功能的调节作用。方法:将ICR小鼠随机分为3组:对照组、模型组和给药组。首先对模型组和给药组注射环磷酰胺造模,0.15 ml/d/只,连续3d,第4d开始对照组和模型组灌胃生理盐水0.3 ml/d/只,给药组灌胃薏米黄酒0.3 ml/d/只,连续灌胃14d。第1、4、18d对各组小鼠称重;第18d处死小鼠解剖取脾脏、胸腺称重并计算脏器系数;取肠道内容物做肠道微生物培养。结果:薏米黄酒与小鼠的体重变化无关;给药组脾脏系数高于对照组有统计学意义(P<0.05),胸腺系数高于对照组和模型组均有统计学意义(P<0.05);给药组细菌总数、大肠杆菌数和乳酸菌数高于模型组和对照组且有显著统计学意义(P<0.01),真菌数量低于模型组和对照组有统计学意义(P<0.05)。结论:该薏米黄酒对机体免疫和肠道功能有一定的调节作用。     

乙型肝炎病毒preC／C基因在杆状病毒载体系统中的表达

通过ＰＣＲ获得长度为６４０ｂｐ的ＨＢＶ ｐｒｅＣ／Ｃ基因片段,将其克隆入转移载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＾＋Ｘ３／４,构建出重组质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＾＝Ｘ３／４－ｐＣ＝Ｃ。利用共转染的方法,构建出既能形成多角体又能表达ｐｒｅＣ／Ｃ基因的重组毒株ＴｎＮＰＶ－Ｃ／Ｃ－ＯＣＣ＾＋。该重组毒株中ｐｒｅＣ／Ｃ基因受到串联的双启动子－合成启动子和含ＨｉｎｄⅢ接头的ＸＩＶ启动子的双重调控。     

茶多酚对大肠杆菌抑菌机理的研究

茶多酚(tea polyphenols,TP)是一种具有广谱抗菌作用的活性质,以大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)为研究对象,采用牛津杯实验研究茶多酚的最小抑菌浓度,并采用结晶紫实验、电导率测定、离子泄漏测定来分析TP对E.coli细胞膜通透性的影响。通过琼脂糖凝胶电泳分析TP对E.coli DNA的影响。结果显示,TP对E.coli的最小抑菌浓度为40μg/m L;结晶紫实验中,随着浓度的增大,OD590也随之增大;随着处理时间的增长,电导率随之增大,离子泄漏随之增多,说明TP可以作用于E.coli的细胞膜,能够改变其通透性。通过琼脂糖凝胶电泳分析可知TP处理后和空白对照组相比较,DNA条带出现变暗、拖尾现象,说明TP能够作用于E.coli的遗传物质DNA。