重组SEF21脂质体口服疫苗对肠炎沙门菌感染的作用

目的 探讨制备脂质体包裹重组SEF21疫苗,并评价其在预防肠炎沙门菌（S. enteritidis）感染中的作用。方法 利用PCR获得SEF21基因,并连接至pET-28a（+）载体。将pET-28a（+）-SEF21在BL21（DE3）大肠埃希菌中表达,通过镍层析柱纯化高表达的rSEF21蛋白。制备脂质体包裹rSEF21疫苗,并对鸡进行2次免疫,然后利用S. enteritidis进行攻毒实验。ELISA检测血清以及肠内容物中的抗体效价。结果 所有被免疫鸡的血清及肠黏液中产生了高效价的IgG和IgA抗体。脂质体包裹rSEF21所免疫的鸡的粪便样本中S. enteritidis数量明显下降。结论 口服脂质体包裹的重组SEF21蛋白疫苗能有效保护鸡对抗S. enteritidis感染。     

基于胶体金标记米曲霉素的免疫层析试纸法快速筛查SLE

建立基于胶体金标记米曲霉素(AOL)的快速筛查系统性红斑狼疮(SLE)的免疫层析试纸法。

利用大肠杆菌BL21原核表达特异性识别核心岩藻糖基的AOL基因(FleA), 并进行纯化及胶体金标记。利用特异性识别IgG的Protein G以及胶体金标记的AOL共同建立快速筛查SLE的免疫层析试纸法(ICS)。

成功表达并纯化AOL重组蛋白, 并进行胶体金标记; 应用胶体金标记AOL的ICS检测SLE患者血清呈阳性反应, 而健康对照及其他自身免疫性疾病(类风湿关节炎、IgA肾病和结缔组织病等)呈阴性反应。

成功建立基于胶体金标记AOL的快速筛查SLE的ICS, 为SLE早期筛查提供了可靠依据。

     

高核心岩藻糖基化母乳促进子代肠道双歧杆菌和乳杆菌的优势生长

目的 探究母乳蛋白核心岩藻糖基化水平对新生儿肠道菌群结构的影响。 方法 采用凝集素(aspergillus oryzae lectin,AOL)检测不同母乳样本的蛋白核心岩藻糖基化水平,按照蛋白核心岩藻糖基化水平的高低将母乳样品分为高核心岩藻糖基化组和低核心岩藻糖基化组,采集两组母乳样品对应喂养的婴儿的粪便,利用PCR-变性梯度凝胶电泳(PCR DGGE)的方法检测两组婴儿粪便中菌群的组成。利用Fut8+/-和Fut8+/+模型小鼠作为母代让其分别哺育野生型子代仔鼠,以进一步阐明核心岩藻糖基化对新生儿肠道菌群的影响。 结果 母亲/母鼠母乳蛋白岩藻糖基化水平高组与低组相比,婴儿肠道中双歧杆菌菌群丰富度增加,仔鼠肠道内乳杆菌定植增加。 结论 高核心岩藻糖基化的母乳可以促进子代肠道中双歧杆菌和乳杆菌等益生菌的生长。     

米曲霉FleA基因的原核表达及纯化

目的 研究米曲霉FleA基因克隆菌株的构建及米曲霉凝集素(Aspergillus oryzae lectin,AOL)蛋白表达。 方法 培养米曲霉RIB40,TRIzol法提取米曲霉RNA,用反转录试剂盒合成FleA全基因,设计引物扩增FleA基因,并将此片段与PJET克隆质粒连接构建克隆菌株,经双酶切筛选出阳性克隆菌株送去测序,将序列正确的克隆菌与表达载体pET 28a(+)分别经过双酶切后连接,转化到宿主菌E. coil BL21,IPTG诱导AOL目的蛋白表达,SDS PAGE 检测分析。 结果 PCR成功扩增获得FleA基因,大小约950 bp,成功连接至PJET克隆载体后,经双酶切回收后又与pET 28a(+)成功连接,经过IPTG诱导后SDS PAGE检测结果显示目的基因成功表达。 结论 该研究成功构建了米曲霉FleA基因,获得了表达蛋白,为今后结构和功能研究奠定了一定的基础。     

母乳蛋白核心岩藻糖基化有利于新生儿肠道双歧杆菌增长

目的 探究母乳蛋白核心岩藻糖基化水平的高低对新生儿肠道双歧杆菌丰富度的影响。 方法 采用凝集素印记(Lectin Blot, LB)检测不同母乳样品的母乳蛋白核心岩藻糖基化水平,根据蛋白核心岩藻糖基化水平的高低将母乳样品分为两组;采集两组母乳样品对应喂养的新生儿的粪便,通过 16S RNA高通量测序的方法检测两组婴儿粪便中菌群的构成。 结果 母亲母乳蛋白核心岩藻糖基化水平高组相对于低组,其对应的新生儿肠道中双歧杆菌丰富度显著增高。 结论 高核心岩藻糖基化的母乳可以促进子代肠道中双歧杆菌的优势生长。     

核心岩藻糖基转移酶Fut8基因敲除小鼠肠道菌群特征

目的探究Fut8基因敲除对ICR小鼠肠道菌群结构的影响。方法分别在Fut8~(+/+)和Fut8~(-/-)小鼠出生后不同时间点检测体重,采集粪便样本,采用PCR-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)的方法检测小鼠粪便中菌群的组成;利用高效液相色谱法(HPLC)测定Fut8~(+/+)和Fut8~(-/-)小鼠Fut8酶活。结果 Fut8~(-/-)小鼠与Fut8~(+/+)小鼠相比生长缓慢(P0.05);完全丧失核心岩藻糖基化活性;肠道菌群结构不同,其中拟杆菌门微生物存在显著差异。结论核心岩藻糖基转移酶Fut8基因敲除对小鼠肠道菌群结构有显著影响。     

酿酒酵母二腺苷四磷酸磷酸解酶Ⅰ片段的表达、纯化及晶体培养研究

[目的]为了培养用于X-衍射的酿酒酵母二腺苷四磷酸磷酸解酶Ⅰ的蛋白晶体,为研究该酶的三维结构和功能打下基础;[方法]构建了表达酿酒酵母二腺苷四磷酸磷酸解酶Ⅰ片段(Apaldn16)的表达质粒,用核苷酸序列分析证明了克隆片段的正确性.将重组载体转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),经.IPTG诱导后,用SDS-PAGE检测了蛋白的表达情况.将粗蛋白用Ni-NTA亲和层析分离,收集组分进一步用Superdex 75分子筛纯化.纯化后的蛋白用SDS-PAGE和质谱检验其纯度和正确性,然后用悬滴气相扩散法进行了蛋白结晶条件的初筛.[结果]成功地用大肠杆菌可溶性地高效表达了Apaldn16蛋白.得到了分子量约为36 kD的单一蛋白条带,纯度在95%以上.质谱结果证明该蛋白纯度高,分子量正确.将纯化后的蛋白用悬滴气相扩散法进行晶体初筛,得到了针状簇晶.此晶体经SDS-PAGE检测,证明为Apaldn16蛋白晶体.[结论]利用大肠杆菌高效表达体系可以正确表达Apalan16蛋白,蛋白经过纯化后,用悬滴气相扩散法可以生长出针状晶体,适合于进一步的三维结构研究.     

植物叶绿体DNA与线粒体DNA的遗传变异

植物叶绿体和线粒体含有DNA,它们表现出不同的遗传变异特性。叶绿体基因组的保守性强,含有特征性重复顺序,它的遗传形式多样而以母系遗传为主,在组织培养和体细胞杂交中具有稳定性强,单亲遗传的特点。线粒体基因组变异性很强,含有主基因组和随体DNA,它的遗传形式是母系遗传,但在体细胞杂交中有时表现为双亲本遗传,并有mtDNA重组,mtDNA在组织培养中发生极大的变异性。在细胞核和线粒体、叶绿体之间存在DNA互相运动的现象。