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采用单因子试验和正交设计2种方法对影响花椒ISSR-PCR反应体系的4个因素(TaqDNA聚合酶、Mg2+、dNTP、引物)在3个水平上进行优化试验。选用L9(34)正交设计方案,从电泳结果中直观获得影响因素的最佳组合。单因子试验分别研究各影响因素不同含量对ISSR-PCR反应的影响情况,找出最佳反应水平。结果表明,适宜花椒ISSR-PCR反应的最佳体系为:20μL的反应体系中,Taq酶1.0U,Mg2+2.0 mmol/L,dNTP 0.2mmol/L,引物1.0μmol/L,10×PCR buffer2.5μL,50 ng模板DNA,53℃退火,35个循环。 相似文献
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