人源抗菌肽LL-37的原核表达及活性鉴定

目的:实现大肠杆菌高效可溶表达人源抗菌肽LL-37。方法:LL-37基因克隆至原核载体pET32a,于大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。运用相关生物信息学软件分析重组蛋白Trx-LL-37的理化性质、亲/疏水性、蛋白质二级结构及其可溶表达概率。实验还考察了不同诱导温度对重组蛋白可溶表达比例的影响。结果:生物信息学分析显示,Trx-LL-37分子量21.5kD,理论等电点6.3,物理性质稳定,二级结构简单,具有可溶表达倾向。重组蛋白最佳诱导温度为17℃,与37℃相比,可溶表达比例由37.2%提高至50.2%,并且总表达量也提高了5%左右。抑菌结果显示纯化产物对多种常见细菌的生长具有抑制作用。结论:可采用融合方式通过原核系统高效可溶表达LL-37,为LL-37的功能研究打下基础。     

奈达铂联合调强放疗对局部晚期鼻咽癌的疗效的作用分析 *

摘要 目的： 分析奈达铂联合强调放疗在局部晚期鼻咽癌患者中的疗效。方法： 选择我院局部晚期鼻咽癌患者 87 例, 随机分为两 个组, 分别是奈达铂组 （ A 组） 和顺铂组 （B 组 ） ,对两组患者接受治疗后的近期疗效、 远期疗效以及毒性反应进行比较分析。结果： A、 B 两组患者鼻咽原发灶完全缓解 （CR ） 率分别为 91.8%、 86.8% （ P=0.632>0.05 ）, 颈部淋巴结转移灶的完全缓解 （CR ） 率分别为 87.8%、 84.2% （ P=0.864>0.05 ）, 均不存在统计学显著性差异。A、 B 两组患者 3 年的总生存率 （ OS ） 分别为： 81.6%、 78.9%, P=0.762; 局部控制率 （ LC ） 分别为： 93.9%、 94.7%, P=0.890; 两组患者 3 年的区域控制率 （RC ） 分别为： 98.0%、 97.3%, P=0.849; 两组患者 3 年 的无远处转移生存率 （DMFS ） 分别为： 79.6%、 76.3%, P= 0.724。A 组患者 Plt 下降发生率为 46.9%显著高于 B 组发生率 34.2% （ P<0.05 ）, 具有统计学显著性差异; A 组患者恶心呕吐的发生率 36.7%显著低于 B 组患者的发生率 76.3% （ P<0.05 ）, 具有统计学显 著性差异; 其余毒性反应的发生率均不存在统计学显著性差异 （P>0.05 ）。结论： 奈达铂联合强调放疗治疗局部晚期鼻咽癌的近期 疗效与远期疗效与顺铂相当, 但是奈达铂胃肠道不良反应发生率较顺铂低, 血小板的降低程度比顺铂更加严重。     

蛋白组学研究抗菌肽对BEL-7402细胞的作用

目的:采用蛋白组学研究家蝇抗菌肽cecropin对人肝癌BEL-7402细胞蛋白的影响,从蛋白质水平探讨抗菌肽抗肿瘤机制.方法:在测定肿瘤细胞生长指数的基础上,通过双向凝胶电泳分离差异蛋白,银染后进行图像分析,对表达差异2倍以上蛋白质点进行胶内酶解和MALDI-TOF-MS检测,获得肽质量指纹谱,应用Mascot搜索引擎在NCBI nr数据库中进行检索鉴定.结果:家蝇抗菌肽cecropin能够抑制BEL-7402细胞的生长,与对照组比较,抗菌肽处理组双向凝胶电泳共答定出12个差异表达蛋白点(上调蛋白6个,下调蛋白6个),大部分与细胞凋亡、细胞代谢、基因转录以及细胞骨架等相关.结论:这为深入研究抗菌肽抗肿瘤机制打下了基础.     

美洲大蠊内生菌几丁质酶基因的克隆、表达及其活性研究 *

Objective: To clone the chitinase gene ChiA from the endophytes of Periplaneta americana soluble expression of the protein and to identify its function.Methods:The chitinase gene ChiA was amplified by PCR from the DNA of Serratia marcescens,which was separated from the gut of Periplaneta americana and obtained by subcloning. The expression plasmid ChiA/pET21b was constructed and analyzed by bioinformatics. The plasmid was transformed into E. coli BL21(DE3) and the postive strains were induced by IPTG at 20℃ for 20h. The bioactivity of the protein was determined by small punch test.Results:The cloned sequence was associated with Serratia marcescens ChiA gene of GenBank and their homology was 99%. The sequence encoded a protein containing of 571 amino acids and expressed stably in prokaryotic system.SDS-PAGE/Western blot show that the soluble target protein was obtained. The small punch test suggested that the target protein had the activity of decomposing chitin and was stronger than that of the Serratia marcescens.Conclusion:The chitinase gene ChiA of the Serratia marcescens from the gut of Periplaneta americana was cloned successfully. The soluble chitinase that shows marked bioactivity was attained by prokaryotic expression system, which has provided theoretical basis for its further application.     

不同生长时期多伞阿魏土壤养分及光合特性比较研究

以多伞阿魏(Ferula ferulaeoides)为研究对象,分别对其展叶期、成熟期、果期土壤含水量、pH、有机质、养分和叶片的净光合速率、蒸腾速率、水分利用率等光合指标的日变化进行比较研究。结果表明:土壤含水量、有机质、养分随着多伞阿魏生长呈下降趋势,而pH却有所上升,但变化幅度不大。在不同土壤深度上,土壤含水量、pH随着土层深度的加深逐渐升高,而土壤有机质、养分含量却随土层的加深逐渐减少。多伞阿魏3个时期的净光合速率日变化均为双峰曲线,在14:00出现明显的“光合午休”现象,日平均大小为展叶期>成熟期>果期;蒸腾速率日变化趋势表现为单峰曲线,在中午14:00达到最高值,日平均大小为展叶期>果期>成熟期;水分利用率日变化总体呈上升趋势,在14:00出现最低值,日平均大小为成熟期>果期>展叶期。通过对多伞阿魏净光合速率和蒸腾速率与影响因子的相关分析显示:在整个生长期气孔导度,光合有效辐射与净光合速率呈显著正相关性;光照强度与蒸腾速率有明显正相关性。     

丰产鲫细菌性败血病的研究Ⅰ——病原分离与鉴定

从患败血病的丰产鲫 (Carassiusauratusofpenze (♀ )×Cyprinusacutidorsalis (♂ ) )脾脏中分离到的一株细菌CSS 4 2 ,经人工感染证实为病原菌。其主要特征为短杆状 ,革兰氏阴性 ,有运动性 ,极端生单鞭毛 ,不产生芽孢 ,无荚膜 ;对 0 1 2 9弧菌抑制剂不敏感 ,能利用葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、肌醇等 ,不利用丙二酸盐、乳糖、木糖、棉子糖、山梨糖、福寿草醇等 ;氧化酶、精氨酸双水解酶阳性 ,尿素、苯丙氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶阴性。经细菌自动化鉴定系统VITEK AMS 60鉴定 ,CSS 4 2菌株为豚鼠气单胞菌(Aeromonascaviae)。药物敏感试验表明 ,CSS 4 2对链霉素、妥布霉素、氯霉素、利福平、诺氟沙星、呋喃妥因等药物敏感 ,对青霉素G等不敏感     

融合基因Mdc-hly的构建及原核表达

构建家蝇天蚕素-人溶菌酶(Mdc-hly)融合基因,实现Mdc-hly基因在大肠杆菌中的表达。通过RT-PCR分别扩增出家蝇天蚕素和人溶菌酶的成熟肽基因序列,再利用Gene-SOEing技术构建融合基因,将融合基因克隆至pET32a表达载体,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导得到高效表达,融合蛋白分子量约为38kD。Western blotting杂交证实了表达蛋白的抗原活性。成功构建了融合其因并进行了原核表达,为进一步的生物活性研究打下基础。     

丰产鲫细菌性败血病的研究I——病原分离与鉴定

从患败血病的丰产鲫 (Carassiusauratusofpenze (♀ )×Cyprinusacutidorsalis (♂ ) )脾脏中分离到的一株细菌CSS-4-2 ,经人工感染证实为病原菌。其主要特征为短杆状 ,革兰氏阴性 ,有运动性 ,极端生单鞭毛 ,不产生芽孢 ,无荚膜 ;对 0/129弧菌抑制剂不敏感 ,能利用葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、肌醇等 ,不利用丙二酸盐、乳糖、木糖、棉子糖、山梨糖、福寿草醇等 ;氧化酶、精氨酸双水解酶阳性 ,尿素、苯丙氨酸脱羧酶、鸟氨     

结核性脑膜炎颅神经损害与脑脊液特点的关系研究

目的:探讨结核性脑膜炎颅神经损害与脑脊液特点的关系。方法:回顾性收集我院神经内科确诊的173例结核性脑膜炎患者临床资料,将所有患者分为伴颅神经损害和不伴颅神经损害两组,对其临床特点及脑脊液外观、压力及细胞学、生化、免疫球蛋白结果进行统计学分析。结果:颅神经损害者占所有病人的22.5%(39/173),视神经损害占61.5%(24/39),外展神经损害占53.8%(21/39),动眼神经损害占15.4%(6/39),听神经损害占15.4%(6/39);颅神经损伤组较无颅神经损伤组脑脊液压力、蛋白质及Ig G、Ig M、Alb明显升高(P0.01或0.001),且颅神经损害者头颅MRI脑膜强化较无颅神经损害者差异有统计学意义(P0.001),而脑脊液外观、白细胞计数及比例两组间并无发现显著差异。结论:结核性脑膜炎患者伴颅神经损害时,脑脊液压力、蛋白质及部分免疫球蛋白较无颅神经损害者明显升高,这将有助于结核性脑膜炎合并颅神经损害的临床诊断,对于有颅神经损害的结核性脑膜膜炎患者加强并早期启动抗结核治疗,以减少蛋白质沉积,从而降低颅神经损害的发生率。     

血小板/淋巴细胞比值评估急性冠脉综合征冠脉病变严重程度的临床价值

目的:探讨血小板淋巴细胞比值(platelet-to-lymphocyte ratio,PLR)评估急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)冠脉病变严重程度中的临床价值。方法:回顾性分析2015年3月至2017年3月在南京市第一医院心血管内科行冠脉造影的168例ACS患者的临床资料,其中不稳定型心绞痛(unstable angina,UA)52例,非ST段抬高型心肌梗死(non-ST-segment elevation myocardial infarction,NSTEMI)54例,ST段抬高型心肌梗死(ST-segment elevation myocardial infarction,STEMI)62例,根据冠脉造影结果进行Gensini评分,采用Spearman相关分析对PLR和Gensini评分进行相关性分析。结果:三组白细胞总数、淋巴细胞计数以及LDL比较差异均有统计学意义(P0.05),STEMI组白细胞总数、淋巴细胞计数明显高于UA组及NSTEMI组,LDL显著低于UA组及NSTEMI组,且NSTEMI组白细胞总数、淋巴细胞计数明显高于UA组,LDL显著低于UA组。此外,NSTEMI和STEMI组PLR和Gensini评分显著均高于UA组(P0.05)。Spearman相关性分析显示PLR与Gensini评分呈正相关(r=0.2205,P=0.0114)。多元逐步回归分析结果显示PLR和白细胞总数均是Gensini评分的影响因素。结论:PLR在评估ACS患者冠脉病变严重程度中具有一定的价值,其值越高,冠脉病变越重。