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以待检测的寡核苷酸本身作为一个引物,加上两个载体特异引物,组成两对PCR引物。含待检测寡核苷酸片段的重组DNA用这两对引物可分别扩增出两个大小不同的片段,而载体DNA只有一对引物(即载体特异引物)可扩增出一个较小的片段。 相似文献
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展望21世纪的生命科学 总被引:17,自引:0,他引:17
对本世纪以来发展迅猛异常的生物科学的概况,特别是近对二三十年来,在分子生物学的带动下,生命科学在结构分子生物学;中心法则及其后的生物学细节研究;基因表达、调控和发育生物学;基因组计划和应用生物学及生物技术的发展;宏观生物学等方面讨论了生命科学的发展和特点,并从四个主要方面对21世纪生命科学(包括生物技术)的发展趋势进行了预测,以达到综览生命科学全局,明确今后发展方向的目的。 相似文献
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应用RT-PCR技术,从人黑色素瘤Bowes细胞株中扩增出人组织型纤溶酶原激活剂(tissue-typeplasminogenactivator,t-PA)cDNA。序列分析证实,与国外的报道完全一致。将含完整阅读框架的人t-PAcDNA克隆至昆虫细胞表达转移载体pBacPAK8中,获得重组质粒pBac-tPA。应用脂质体共转染法,将pBactPA和线性化杆状病毒BacPAK6DNA共转染Tn-5B-1昆虫细胞。经空斑筛选获得11株重组病毒。经PCR鉴定与生物活性测定,获得一株高效表达t-PA的重组病毒BactPA3。在含胎牛血清的培养基中,t-PA表达活性在感染(MOI≈10)后72h左右达到最高,为3.04×103IU/ml,即相当于1.8×104IU/106细胞;在无血清培养基中,t-PA最高表达水平相差不大,但时间为感染后132h左右。经SDS-PAGE纤维蛋白自显影分析,分子量为68kda左右。与从人黑色素瘤细胞培养液中提纯的天然t-PA相比,其受纤维蛋白原激活的特性、和纤维蛋白的亲和力及在血浆中的失活速率基本相同。表达的t-PA在血液循环中的半衰期为7min。 相似文献
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本文发展的技术可以使金鱼草下胚轴外植体不定芽高频再生。添加有2mg/lBAP和0.5mg/lNAA的MS培养基上再生芽出得又快又多,淡黄色愈伤组织易于形成并存活。但主要依赖的是6-BAP。MS培养基中含有0.1mg/l或6mg/l浓度的6-BAP均能刺激芽的发育,最适浓度为2-3mg/l.仅加2,4-D,也能形成正常的黄色愈伤组织。但这样形成的愈伤组织在只含有0.1-6mg/l6-BAP或含有2mg/l6-BAP和0.5mg/lNAA的MS培养基上均不能分化生出再生芽来。仅加NAA,能够刺激下胚轴形成根。加入AgNO_3,则抑制不定芽的再生,并导致整个外植体变成棕色而死亡。组织化学分析结果表明:不定芽的再生源于下胚轴外植体表皮细胞。在不含有任何生长调节剂的MS培养基上,再生苗均能形成根。再生植株移栽至花盆可开花结实。 相似文献
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利用农杆菌系统将超甜定基因导入烟草 总被引:8,自引:1,他引:7
由pUR528构建中间载体pEHT9,再构建超甜定植物表达载体pBIT7。通过直接转化法将pBIT7导入农杆菌,然后利用农杆菌系统转化烟草。经PCR、PC R-S outhern和Southern杂交证实,超甜定基因已整合到烟草基因组中。
Abstract:pEHT9 was constructed from pUR528,and used for the construction of plant thaumatin expression vector pBIT7.Then pBIT7 was introduced to Agrobacterium through direct transformation.Subsequently tobacco was transformed through Agrobacterium-mediated system.It has been confirmed that thaumatin gene has integrated into the genome of transgenic tobacco by PCR,PCR-Southern and Southern blot analyses. 相似文献
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转多基因水稻植株的获得 总被引:6,自引:0,他引:6
将2-3个外源目的基因与筛选标记基因hpt连在同一个载体上,用基因枪法对1个粳稻品种和4个籼稻品种进行了转化,粳稻中花8号转化频率最高为56.4%,灿稻七丝软占、特青、奇妙香、九六零转化频率分别为6.4%,2.5%,2.8%和1.7%,分子杂交实验证明,通过两次潮霉素抗性筛选的T0代再生植株100%含有hpt基因,其中70%以上含有外源目的基因的完整表达结构。遗传分析表明,大部分T1代植株中潮霉素抗敏比符合盂德尔3:1的分离规律。 相似文献