导尿困难200例临床分析

目的总结分析导尿困难的原因及处理过程,探讨提高导尿成功率的方法。方法2009年1~12月我院泌尿专科门诊、急诊、住院及会诊共有导尿困难200例,不包括急诊尿道外伤导尿。插管遵循步骤为改进技术尿道注入石蜡油,换尿管,用超细管,尿管内撑金属芯及对因治疗。统计导尿困难的原因与解决方法。结果导尿困难者插管困难占179例,水囊注水困难6例,是否置管成功难以确认15例。插管困难原因包括包茎包皮口小7例,尿道外口萎缩3例,尿道外口肿瘤堵塞1例,尿道外口小4例,尿道细3例,尿道狭窄6例,导尿致尿道损伤2例,前列腺部及膜部梗阻146例,膀胱颈梗阻4例,膀胱内受阻3例。经提高技术、注入润滑油、换管等插管成功86%(154/179),使用辅助工具插管成功10.6%(19/179),需手术导尿3.4%(6/179)。结论导尿困难不但是插管困难,还有判断确认的问题。插管困难大多见于后尿道,技术不娴熟或润滑不足是主要原因,前列腺增生并不构成主要困难。了解病情,遵循适当的顺序及方法能提高导尿的成功率,导尿困难需行手术者极少。     

代谢工程改造Gluconobacter suboxydans生产2-酮基-D-葡萄糖酸

2-酮基-D-葡萄糖酸是重要的抗氧化剂和食品添加剂——D-异抗坏血酸的重要前体。弱氧化葡糖酸杆菌(Gluconobacter suboxydans)具有丰富的周质空间氧化还原酶类,可将葡萄糖氧化为葡萄糖酸再氧化为2-酮基-D-葡萄糖酸。以提高2-酮基-D-葡萄糖酸的产量和减少副产物为目标,采用同源重组染色体修饰策略,将编码甘油脱氢酶的基因gldh置换为编码葡萄糖脱氢酶的基因gdh,将编码山梨醇脱氢酶的基因sdh置换为编码2-酮-D-葡萄糖酸脱氢酶的基因ga-2-dh。经PCR、酶活性显色及发酵产物HPLC检测验证表明:构建的工程菌株gdh和ga-2-dh基因被强化而gldh和sdh被敲除;使用10%的葡萄糖复合培养基,摇瓶发酵72h,工程菌2KGA3发酵液中没有副产物5-酮基-葡萄糖酸,2-酮基-D-葡萄糖酸的含量终浓度达到72.3 g/L,比野生菌株提高42.2g/L,工程菌和野生菌的2-D-KGA质量转化率分别为72.3%和30.1%,工程菌比野生菌提高1.4倍。构建获得的工程菌,不需要外加抗生素,可以保持稳定遗传,对于工业化规模生产具有一定优势,为获得可产业化显示的优势遗传资源打下了基础。     

构建尿嘧啶磷酸核糖转移酶基因缺失菌株实现Gluconobacter suboxydans基因组无痕修饰

弱氧化葡糖酸杆菌(Gluconobacter suboxydans)可高效不完全氧化多种糖类和醇类等多羟基化合物,生成相应的醛类、酮类和有机酸类等产物,是一类重要的工业微生物。利用同源重组技术对基因组进行修饰改造是工业育种的有效手段。传统方法多选用抗生素为筛选标记,存在诸多缺陷。构建尿嘧啶磷酸核糖转移酶基因缺失菌株以实现Gluconobacter suboxydans基因组无痕修饰为目标,将自杀质粒p MD18-Jqupp电转化至野生型Gluconobacter suboxydans J12中,通过四环素抗性和5-氟尿嘧啶双重筛选,获得敲除了编码尿嘧啶磷酸核糖转移酶的基因upp的突变株。经生理验证表明,该突变株在含0.5mg/ml 5-氟尿嘧啶的培养基上生长,而回补upp基因后,在0.5mg/ml 5-F氟尿嘧啶的培养基上不生长。说明获得的G.suboxydans-upp突变株能以upp基因作为负向筛选标记,通过两次同源重组,实现Gluconobacter suboxydans基因组无痕修饰与改造,为今后代谢工程改造Gluconobacter suboxydans获得有价值的工业菌种奠定基础。     

Ketogulonigenium vulgare四环素诱导表达穿梭质粒的构建

采用重叠延伸PCR方法合成阻遏蛋白的编码基因tetr和插入操纵基因teto的Ketogulonigenium vulgare山梨糖脱氢酶启动子psndhteto的基因序列,借助宽宿主质粒p BBR1MCS-5,构建四环素诱导表达的穿梭质粒,转化Ketogulonigenium vulgare,获得阳性重组菌株,实现卡那霉素抗性的调控表达,结果表明:培养重组菌株2小时后,添加0.4μg/ml的四环素诱导剂后,能够在含有卡那霉素的培养基中生长,不添加四环素诱导剂的重组菌株不能在含卡那霉素的培养基中生长,确定了最适四环素的诱导浓度为0.6μg/ml。