NAMPT 真核表达载体构建及其对肝癌细胞增殖的影响

目的:为探索烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)对肝癌细胞增殖的影响,构建pc DNA3.1(+)-NAMPT真核表达载体。方法:以正常肝细胞的c DNA为模板,通过PCR扩增得到NAMPT全长序列,经酶切、连接、转化等步骤构建真核表达载体。重组质粒经酶切鉴定及测序验证后,用脂质体转染法转染肝癌细胞MHCC-97H和正常肝细胞HL-7702,免疫印迹检测NAMPT蛋白表达情况;WST实验检测过表达NAMPT后对MHCC-97H和HL-7702增殖的影响。结果:真核表达载体pc DNA3.1(+)-NAMPT构建成功,转染HL-7702和MHCC-97H细胞后,NAMPT蛋白表达水平较空白组分别升高了83%和180%;过表达NAMPT可促进细胞增殖,而抑制NAMPT活性后,细胞增殖被抑制(P0.001)。结论:成功构建了真核表达载体pc DNA3.1(+)-NAMPT,并发现NAMPT表达水平与细胞增殖密切相关,为进一步探索NAMPT表达在肝癌细胞增殖的分子作用机制和筛选新的肿瘤药物靶点奠定了基础。     

环氧化物水解酶2在肝细胞癌中的表达水平与功能作用

本研究通过公共数据和实验数据,全面分析环氧化物水解酶2(epoxide hydrolase 2, EPHX2)在肝细胞癌中的表达情况、功能作用以及预后意义。利用GEO和MitoCarta数据集,筛选肝细胞癌中呈差异表达的线粒体相关基因;利用TCGA数据库分析EPHX2及其相关基因在肝细胞癌中的表达水平;运行R包绘制Kaplan-Meier生存曲线和功能富集分析;基于STRING和GSEA构建蛋白质互作网络和基因集富集分析;荧光定量PCR和GEO数据集验证EPHX2在肝细胞癌中的表达水平。本研究共筛选得到15个在肝细胞癌中呈差异表达的线粒体相关基因。EPHX2在肝细胞癌组织中的表达水平显著降低(P<0.01)。EPHX2表达水平与肝癌患者性别、分期和级别有关,而与年龄、T分期等因素无关。与EPHX2低表达组肝癌患者相比,EPHX2高表达组肝癌患者预后较好。功能富集结果显示,EPHX2与补体途径、脂肪酸降解等信号通路有关。蛋白质互作网络结果显示,EPHX2与HAO1、AGXT、ACOX1、GSTκ1、SCP-2、CAT、CYP2C8,CYP2C9,CYP2B6,和CYP2J2等密切相关。GSEA结果显示,EPHX2低表达组与肝癌细胞增殖、肝癌复发等基因集正相关。荧光定量PCR和GEO数据集验证结果显示,EPHX2在肝细胞癌组织和肝癌细胞株中呈显著低表达。EPHX2在肝细胞癌中呈显著低表达,提示其可能在肝细胞癌发生发展过程中发挥抑癌基因作用,但具体作用机制还需进一步验证。     

沉默CDC37抑制结肠癌细胞Lovo和Ls174T侵袭迁移北大核心CSCD

前期研究发现周期分裂蛋白37(cell division cycle 37,CDC37)的异常表达可能与结直肠腺癌的转移有关,但是其作用机制尚不清楚。本研究通过实时定量PCR和免疫印迹实检测CDC37在不同肠癌细胞中的m NRA和蛋白质表达水平,结果发现CDC37在结肠癌Lovo和Ls174T细胞中表达较高。siRNA靶向沉默CDC37表达后,细胞侧向迁移能力、垂直迁移能力、侵袭活性均显著降低。实时定量PCR和免疫印迹实验结果发现,敲除CDC37后,MMP9和MMP2的m NRA和蛋白质表达水平均显著下调。以上研究结果表明,CDC37通过调节MMP9和MMP2等侵袭转移关键分子的表达在结肠癌细胞侵袭转移过程中发挥关键作用。     

结直肠腺癌转移相关基因的研究进展

结直肠腺癌的发生和发展是一个涉及多基因,多步骤的复杂过程。在结直肠腺癌的发生发展过程中,癌基因被激活,或者抑癌基因被沉默,或者基因间的相互作用,最终导致结直肠腺癌的不断发展,进而导致癌症的转移与浸润。近年来研究发现,与结直肠腺癌迁移与浸润相关的的基因越来越多。但是,这些基因是如何作用,在结直肠腺癌的发病过程中是否起着重要的作用。本文就近年来与结直肠腺癌迁移与浸润相关的基因,例如:RUNX3、TGF-β1、MACC1、MMP-2、MMP-7等展开综述。     

靶向FBXL20基因的siRNA片段的筛选及其验证

在人结肠腺癌SW480细胞株及口腔鳞癌HSC3细胞株中,筛选有效干扰fbxl 20的siRNA片段.设计合成3对靶向fbxl 20 mRNA的小干扰RNA片段,通过阳离子脂质体介导转染SW480细胞和HSC3细胞. 结果发现siRNA-1, siRNA-2, siRNA-3均能抑制SW480细胞和HSC3细胞fbxl20 mRNA的表达,siRNA-2抑制作用最明显,抑制率分别为86.8％和100%. MTT试验显示：siRNA-2转染SW480细胞和HSC3细胞后,细胞增殖能力明显降低,细胞增殖抑制率分别为29.5%和43.4%. Transwell小室迁移实验表明,HSC3细胞在转染24 h后,细胞迁移能力明显减弱,迁移抑制率高达72.4%. 流式细胞术检测细胞凋亡结果显示：转染36 h后,SW480细胞实验组细胞凋亡率为21.9%;转染24 h后,HSC3细胞实验组细胞凋亡率为44.7%. 本实验成功的筛选出了特异性的抑制fbxl 20基因的siRNA片段,并初步鉴定了fbxl 20基因的功能.