从噬菌体展示随机12肽库中筛选与IRS-1PH结构域相结合的多肽模体

将胰岛素受体底物-1(IRS-1)的PH结构域(pleckstrin homology domain)编码序列克隆到融合表达载体pRSETA中,阳性克隆经IPTG诱导,表达出氨基端带6个连续组氨酸残基的融合蛋白。经检测,表达的目的蛋白一部分以可溶形式存在。利用Ni-NTA金属螯合亲和层析法在非变性条件下对表达的目的蛋白进行纯化,纯度大于98％。将纯化的目的蛋白包被于聚苯乙烯平皿上作为靶蛋白,经过4轮淘筛,得到能够与IRS-1的PH结构域相结合的重组噬菌体克隆;从中随机挑选出50个克隆进行DNA序列测定,对获得的短肽序列进行了分析。并通过ELISA检测了这些克隆与IRS-1的PH结构域的结合活性。     

酪氨酸激酶EphB2受体N端球状结构域的表达及纯化

根据酪氨酸激酶ＥｐｈＢ２受体的碱基序列,用ＰＣＲ方法扩增其结合配体的关键结构域Ｎ端球状区,定向克隆到融合表达质粒载体ｒＲＳＥＴ Ａ中,转化大肠杆菌ＪＭ１０９（ＤＥ３）。阳性克隆经ＩＰＴＧ诱导,由Ｔ７启动子调控表达了氨基端带６个连续组氨酸残基的融合蛋白。电泳分析表明,表达的融合蛋白主要以包含体的形式存在,约占细菌总蛋白的１４％。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹确证,利用Ｎｉ－ＮＴＡ金属螯合亲和色谱法在变性条件下对     

替换HIV-1衣壳蛋白基因SHIV的构建及其活性测定

将猴免疫缺陷病毒(Simianimmunodeficiencyvirus,SIVmm239)中gag基因的衣壳蛋白部分置换成人免疫缺陷病毒(Humanimmunodeficiencyvirustype1,HIV-1HXBc2)的相应部分,构建出替换了衣壳蛋白基因的人/猿嵌合免疫缺陷病毒(SHIV)原病毒DNA。用此SHIV原病毒DNA转染293T细胞,细胞中能够检测到嵌合病毒基因的转录与翻译;在细胞培养液上清中亦可检测到装配出的病毒颗粒。病毒颗粒形态正常,含有基因组RNA,具有反转录酶活性,嵌合的外源衣壳蛋白能够正确剪切,形成棒状的核心。将此嵌合SHIV病毒感染MT4细胞,病毒能够吸附并进入细胞,能完成反转录过程,但不能增殖。     

噬菌 展示法筛选与EphB2结合的短肽

酷氨酸蛋白激酶受体ＥｐｈＢ２的Ｉｇ类似区,克隆到融合表达闰载体ｐＥＴ２８ａ中,阳性克隆经ＩＰＴＧ诱导,表达出氨基端带６个连续组氨酸残基的融合蛋白。利用Ｎｉ－ＮＴＡ金属螯合亲和层析法有变性条件下对表达的蛋白进行纯化,纯度大于９４％。以此纯化蛋白为靶,将其包被于ＥＬＩＳＡ板上,经过三轮亲和筛选,从噬菌体随机７肽库中筛选到１９个具有ＥｐｈＢ２活性的重组噬菌体克隆,对阳性噬菌体克隆的短肽序列进行了分析。     

长期观察多种听觉诱发电位的一种动物模型

在豚鼠的面神经管和颅顶同时植入电极、在清醒状态下长期观察耳蜗电图、听觉诱发的ＳＮ４电位、听觉脑干电位、听觉中潜伏期反应、听觉中潜伏期反应的４０Ｈｚ相关电位及颅顶慢电位等听觉诱发电位,电极不接触、不损害听觉结构,埋植３、６个月的成功率分别为８８．１０％、８０．９５％,埋植１２－１８个月的成功率为７６．１９％。     

酵母双杂交系统及其应用

酵母双杂交系统（yeast two-hybrid system)是直接于细胞内研究蛋白质间相互作用的一种灵敏度很高,且非常有效的遗传学方法,在不同研究领域中广泛应用,并不断完善及改进,发展出单杂交系统（one-hybid system)和三杂交系统（three-hybrid system)等一系列相关的技术,克服了原系统的局限,本文对双杂交系统的原理,发展概况,应用,存在问题和前景等进行了综述。     

黄土丘陵小流域景观格局指数的粒度效应

采用基于GIS的景观格局分析法,研究了1975-2007年黄土丘陵沟壑区大南沟小流域景观格局指数在1～50 m粒度范围内的粒度效应.结果表明：研究区小流域景观格局指数的粒度效应明显,不同年份之间的差异显著;该区景观格局指数的粒度效应可分为5种类型,即稳定不变型、平稳降低型、波动降低型、波幅增强型和不规则变化型.研究区景观的斑块丰富度属于稳定不变型,即随着粒度增大保持不变;边界长度、边界密度、景观形状指数、聚合度指数和蔓延度指数属于平衡降低型,即随着粒度增大呈显著的线性降低趋势;分维数随粒度增大呈波动递减趋势,属于波动降低型粒度效应;景观总面积、Shannon多样性指数和Shannon均匀度指数的波幅呈显著增大趋势,属于波幅增强型粒度效应;不规则变化型粒度效应的景观格局指数包括斑块数、斑块密度、平均斑块面积、最大斑块指数、破碎度指数和景观分离度指数.1975年研究区上述景观格局指数的粒度效应与其他年份之间的差异显著,甚至截然相反.     

BIV在人源细胞MT-4中的活性研究

牛免疫缺陷病毒(Bovine immunodeficiency virus, BIV)在分类上属于反转录病毒科的慢病毒属,目前尚未见BIV感染人的报道.为进一步确定BIV对人源细胞的感染性,我们用BIV127cDNA转染人源细胞MT-4,通过RT-PCR检测到BIVgag基因的转录,IFA则显示BIV127的gag或gag-pol基因在MT-4细胞中得到了翻译,而RT值的测定也有力地说明BIV127cDNA已经在MT-4细胞内表达出有活性的反转录酶,但细胞传代实验表明BIV不能在MT-4细胞内复制.     

人脑内一含有ACP样结构域新基因的发现

为寻找脑内新基因，以正常成人全脑cDNA为模板,采用锚定PCR方法进行扩增, 将经琼脂糖DNA电泳鉴定获得的一约1 200 bp大小的特异性条带回收，并克隆入T easy载体.用310 Genetic Analyzer进行自动测序.所得序列进行生物信息学分析：BLAST相似性分析结果证明所得序列为新序列，读框分析表明，该序列中存在一完整编码区，编码含357个氨基酸的蛋白质.ProDom软件分析发现其含有酰基携带蛋白（ACP）样结构域.随后，经3′RACE法克隆到该基因的全长cDNA,其全长为2 024 bp,染色体定位在14q11.2,含有16个外显子，15个内含子，该基因已登录到GenBank.经设计编码区引物，从T easy载体扩增出编码区后再克隆入pGEX-4T1表达载体，经异丙基硫代-D-乳糖苷(IPTG)化学诱导表达.其编码区克隆入pGEX-4T1表达载体后，转入JM109宿主菌，经IPTG诱导已得到表达.点杂交及RNA印迹表明，该基因在正常成人脑内广泛高表达.     

酪氨酸激酶受体Eph亚族的研究进展

酪氨酸激酶受体（RTK）参与细胞生长、分化、胚胎发育及细胞内信号传递等过程,具有相当重要的生理功能.目前已发现50多种RTK基因分属于14种亚族,Eph亚族是其中最大的家族,由14个基因组成,一些基因主要在脑的发育中表达,另一些则在各种组织中广泛表达.最近该亚族胞外配体的发现为深入研究其生理功能打下基础.综述了Eph亚族成员的来源、表达及其配体的研究概况.