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将胰岛素受体底物-1(IRS-1)的PH结构域(pleckstrin homology domain)编码序列克隆到融合表达载体pRSETA中,阳性克隆经IPTG诱导,表达出氨基端带6个连续组氨酸残基的融合蛋白。经检测,表达的目的蛋白一部分以可溶形式存在。利用Ni-NTA金属螯合亲和层析法在非变性条件下对表达的目的蛋白进行纯化,纯度大于98%。将纯化的目的蛋白包被于聚苯乙烯平皿上作为靶蛋白,经过4轮淘筛,得到能够与IRS-1的PH结构域相结合的重组噬菌体克隆;从中随机挑选出50个克隆进行DNA序列测定,对获得的短肽序列进行了分析。并通过ELISA检测了这些克隆与IRS-1的PH结构域的结合活性。 相似文献
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将猴免疫缺陷病毒(Simianimmunodeficiencyvirus,SIVmm239)中gag基因的衣壳蛋白部分置换成人免疫缺陷病毒(Humanimmunodeficiencyvirustype1,HIV-1HXBc2)的相应部分,构建出替换了衣壳蛋白基因的人/猿嵌合免疫缺陷病毒(SHIV)原病毒DNA。用此SHIV原病毒DNA转染293T细胞,细胞中能够检测到嵌合病毒基因的转录与翻译;在细胞培养液上清中亦可检测到装配出的病毒颗粒。病毒颗粒形态正常,含有基因组RNA,具有反转录酶活性,嵌合的外源衣壳蛋白能够正确剪切,形成棒状的核心。将此嵌合SHIV病毒感染MT4细胞,病毒能够吸附并进入细胞,能完成反转录过程,但不能增殖。 相似文献
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酷氨酸蛋白激酶受体EphB2的Ig类似区,克隆到融合表达闰载体pET28a中,阳性克隆经IPTG诱导,表达出氨基端带6个连续组氨酸残基的融合蛋白。利用Ni-NTA金属螯合亲和层析法有变性条件下对表达的蛋白进行纯化,纯度大于94%。以此纯化蛋白为靶,将其包被于ELISA板上,经过三轮亲和筛选,从噬菌体随机7肽库中筛选到19个具有EphB2活性的重组噬菌体克隆,对阳性噬菌体克隆的短肽序列进行了分析。 相似文献
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长期观察多种听觉诱发电位的一种动物模型 总被引:1,自引:0,他引:1
在豚鼠的面神经管和颅顶同时植入电极、在清醒状态下长期观察耳蜗电图、听觉诱发的SN4电位、听觉脑干电位、听觉中潜伏期反应、听觉中潜伏期反应的40Hz相关电位及颅顶慢电位等听觉诱发电位,电极不接触、不损害听觉结构,埋植3、6个月的成功率分别为88.10%、80.95%,埋植12-18个月的成功率为76.19%。 相似文献
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黄土丘陵小流域景观格局指数的粒度效应 总被引:4,自引:0,他引:4
采用基于GIS的景观格局分析法,研究了1975-2007年黄土丘陵沟壑区大南沟小流域景观格局指数在1~50 m粒度范围内的粒度效应.结果表明:研究区小流域景观格局指数的粒度效应明显,不同年份之间的差异显著;该区景观格局指数的粒度效应可分为5种类型,即稳定不变型、平稳降低型、波动降低型、波幅增强型和不规则变化型.研究区景观的斑块丰富度属于稳定不变型,即随着粒度增大保持不变;边界长度、边界密度、景观形状指数、聚合度指数和蔓延度指数属于平衡降低型,即随着粒度增大呈显著的线性降低趋势;分维数随粒度增大呈波动递减趋势,属于波动降低型粒度效应;景观总面积、Shannon多样性指数和Shannon均匀度指数的波幅呈显著增大趋势,属于波幅增强型粒度效应;不规则变化型粒度效应的景观格局指数包括斑块数、斑块密度、平均斑块面积、最大斑块指数、破碎度指数和景观分离度指数.1975年研究区上述景观格局指数的粒度效应与其他年份之间的差异显著,甚至截然相反. 相似文献
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牛免疫缺陷病毒(Bovine immunodeficiency virus, BIV)在分类上属于反转录病毒科的慢病毒属,目前尚未见BIV感染人的报道.为进一步确定BIV对人源细胞的感染性,我们用BIV127cDNA转染人源细胞MT-4,通过RT-PCR检测到BIVgag基因的转录,IFA则显示BIV127的gag或gag-pol基因在MT-4细胞中得到了翻译,而RT值的测定也有力地说明BIV127cDNA已经在MT-4细胞内表达出有活性的反转录酶,但细胞传代实验表明BIV不能在MT-4细胞内复制. 相似文献
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为寻找脑内新基因,以正常成人全脑cDNA为模板,采用锚定PCR方法进行扩增, 将经琼脂糖DNA电泳鉴定获得的一约1 200 bp大小的特异性条带回收,并克隆入T easy载体.用310 Genetic Analyzer进行自动测序.所得序列进行生物信息学分析:BLAST相似性分析结果证明所得序列为新序列,读框分析表明,该序列中存在一完整编码区,编码含357个氨基酸的蛋白质.ProDom软件分析发现其含有酰基携带蛋白(ACP)样结构域.随后,经3′RACE法克隆到该基因的全长cDNA,其全长为2 024 bp,染色体定位在14q11.2,含有16个外显子,15个内含子,该基因已登录到GenBank.经设计编码区引物,从T easy载体扩增出编码区后再克隆入pGEX-4T1表达载体,经异丙基硫代-D-乳糖苷(IPTG)化学诱导表达.其编码区克隆入pGEX-4T1表达载体后,转入JM109宿主菌,经IPTG诱导已得到表达.点杂交及RNA印迹表明,该基因在正常成人脑内广泛高表达. 相似文献
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酪氨酸激酶受体Eph亚族的研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
酪氨酸激酶受体(RTK)参与细胞生长、分化、胚胎发育及细胞内信号传递等过程,具有相当重要的生理功能.目前已发现50多种RTK基因分属于14种亚族,Eph亚族是其中最大的家族,由14个基因组成,一些基因主要在脑的发育中表达,另一些则在各种组织中广泛表达.最近该亚族胞外配体的发现为深入研究其生理功能打下基础.综述了Eph亚族成员的来源、表达及其配体的研究概况. 相似文献