PCR用于病毒学领域的研究现状

最近3年兴起的一项新技术称为聚合酶链锁反应(Polymerase Chain Reaction,简称PCR),又称无细胞分子克隆系统或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法,是基因扩增技术的一次重大革新。可将极微量的靶DNA特异地扩增上百万倍,从而大大提高对DNA分子的分析和检测能力,能检测到单分子DNA或对每10万个细胞中仅含1个靶DNA分子的样品,因而此方法立即在分子生物学、微生物学、医学及遗传学等各领域广泛应用和迅速发展。目前国内外都相继将PCR用于病毒学检验和研究,文献逐年增多,据Medline CD-Rom文献光盘检索:1987年至1989年分别为75、280和860篇,1990年已增至1697篇,美国已出版了PCR专著。由于PCR具有敏感、特异、快速、简便等优点,已在病毒学领域中显示出巨大的应用价值和广阔的发展前景。     

人巨细胞病毒在包皮细胞培养中的潜伏性感染

用具有特异性抑制蛋白质糖基化作用的含氨基葡糖的衣霉素Tunicamycin(TM)处理人胚包皮细胞(HEF)建立起人巨细胞病毒(HCMV)的潜伏性感染模型。观察了TM对HEF细胞及HCMV的毒性作用,当TM浓度大于500ng/ml时对单层细胞生长有影响;在TM浓度为500ng/ml时,细胞生长虽受一定程度的影响,但仍然逐步生长扩增;不同浓度的TM对HCMV有不同程度的影响,但不能将全部HCMV在短期内完全抑制,在TM含量1000ng/ml的维持液中处理5日的HCMV感染细胞培养物中未检出感染性病毒。感染HCMV的HEF单层细胞保持在含TM500ng/ml的维持液中于37℃培养7日,然后换加不含TM的维持液并改置40.5℃中培养,可保持HCMV以非感染性的病毒状态潜伏于HEF细胞内长达135日;在此潜伏期间如将细胞培养物由40.5℃再移置37℃中培养,HCMV能被激活为可检测到高滴度的感染性病毒。定期取在40.5℃中培养的HCMV潜伏感染细胞培养物进行感染中心测定(Infections Center Assays),感染中心滴度(Infectous Center Titer)为0.0004％～0.005％,只有很低的病毒重激活率。对潜伏性感染及TM引起疱疹病毒的潜伏性机理结合文献作了简要讨论。