O139霍乱弧菌质粒基因组文库的建立及O抗原基因的筛选

合成O-抗原的基因是串联在一起的一个基因簇,提取O139霍乱弧菌基因组DNA,限制性内切酶EcoRⅠ酶切,电泳回收4～20kb的DNA片段,构建质粒基因组文库.随机筛选重组克隆,获得一株可与O139霍乱弧菌抗血清发生凝集反应的重组克隆,命名为大肠杆菌DH5a(pMG320).经鉴定分析重组克隆所表达的O-抗原具有良好的免疫原性及反应原性.酶切分析质粒pMG320,推知其O-抗原基因大小约4.6kb.这为今后O139霍乱疫苗的研制及O139霍乱弧菌O-抗原基因的结构和功能研究提供了条件.     

肿瘤免疫治疗的一种新技术——肽脉冲

肿瘤免疫治疗的一种新技术--肽脉冲曲殿波刘传暄综述马清钧审校（军事医学科学院生物工程研究所北京１００８５０）前言利用疫苗来治疗肿瘤的想法由来以久,甚至可以追溯到２００年前［１］。本世纪５０年代,研究人员发现移植过肿瘤组织的动物在进行肿瘤移植时就可以产生排斥反应［１］引起这种反应的抗原被称之为肿瘤特异性移植抗原（Ｔｕｍｏｒｓｐｅｃｉｆｉｃｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎａｎｔｉｇｅｎ,ＴＳＴＡ）...     

O139霍乱弧菌LPS基因在大肠杆菌中的克隆和表达

利用粘粒载体pCOS5构建了国内分离的O139霍乱弧菌的基因组文库,并从文库中筛选获得可以表达O139霍乱弧菌脂多糖的重组克隆株E.coliJM109(pMG310)。重组粘粒pMG310经酶切分析,所克隆的外源DNA片段大小为37kb。实验证明：重组克隆株E.coliJM109(pMG310)所表达的脂多糖具有良好的免疫原性及反应原性。     

Ｏ１３９霍乱弧菌质粒基因组文库的建立及Ｏ—抗原基因的筛选

合成Ｏ－抗原的基因是串联在一起的一个基因族,提取Ｏ１３９霍乱弧菌基因组ＤＮＡ,限制性内切酶ＥcoＲ２Ⅰ酶切,电泳回收４－２０kb的ＤＮＡ片段,构建质粒基因组文库。随机筛选重组克隆,获得一株可与Ｏ１３９霍乱弧菌抗菌清发生凝集反应的重组克隆,命名为大肠杆菌ＤＨ５α（pMG320)。经鉴定分析重组克隆所表达的Ｏ－抗原具有良好的免疫性及反应原性。酶切分析质粒pMG320,推知其Ｏ－抗原基因大 ４．６kb.这为今后Ｏ１３９霍乱疫苗的研制及Ｏ１３９霍乱弧菌Ｏ－抗原基因的结构和功能研究提供了条件。     

霍乱弧菌O139脂多糖基因的克隆表达

霍乱弧菌脂多糖作为一种保护性抗原,其抗血清可以抑制霍乱弧菌在小肠粘膜上的粘附并且可以破坏霍乱弧菌,因此在研制霍乱疫苗时可以作为一种有用的成分。同时,脂多糖作为基因代谢的二级产物,是由多基因协同作用经酶促合成的。这些基因以串联体的形式集中在一起,这为我们的克隆表达提供了便利条件。 本研究首先用粘粒pCOS5构建了O139霍乱弧菌基因组粘粒文库,在此基础上采用玻片凝集法从基因组文库中初步筛选出可在大肠杆     

O139霍乱弧菌O-抗原基因的克隆及表达

霍乱弧菌脂多糖已经被公认为是一种保护性抗原。它是由三部分组成:O-抗原、核心多糖和磷脂A。其O-抗原具有特异的免疫原性及抗原性,霍乱弧菌的抗血清与脂多糖的抗原抗体反应是针对其O-抗原部分。因此,克隆表达O-抗原基因更便于我们进行基因的操作和构建多价疫苗,它比克隆脂多糖基因更具有实际应用价值。 本研究在建立O139霍乱弧菌质粒基因组文库的基础上,利用抗原抗体的凝集反应从基因组文库中初步筛选出可能表达O-抗原的阳     

O139霍乱弧菌质粒基因组文库的建立及O抗原基因的筛选

合成O抗原的基因是串联在一起的一个基因簇,提取O139霍乱弧菌基因组DNA,限制性内切酶EcoRⅠ酶切,电泳回收4～20kb的DNA片段,构建质粒基因组文库。随机筛选重组克隆,获得一株可与O.139霍乱弧菌抗血清发生凝集反应的重组克隆,命名为大肠杆菌DH5α(pMG320)。经鉴定分析重组克隆所表达的O抗原具有良好的免疫原性及反应原性。酶切分析质粒pMG320,推知其O抗原基因大小约4.6kb。这为今后O.139霍乱疫苗的研制及O.139霍乱弧菌O抗原基因的结构和功能研究提供了条件。