非编码RNA与病毒性心肌炎

病毒性心肌炎(Viral myocarditis,VMC)是一种由病毒感染所引起的以心肌细胞炎症为特征的疾病。由于病毒性心肌炎的发病机制尚未完全研究清楚,因此该病的诊断及治疗对于临床医生来说仍具有极大的挑战性。非编码RNAs (Non-coding RNAs,ncRNAs)是一类不具有编码蛋白质功能的RNA,越来越多的研究表明ncRNAs参与到调控VMC的发生和发展过程中,这可能成为VMC的治疗或诊断的新研究靶点。文中对近3年来关于ncRNAs在VMC的发病机制及诊断中可能发挥的作用进行了综述。     

大鼠骨髓间充质干细胞分离与培养条件的优化研究

目的:建立和优化大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的分离培养条件,以获得群体均一、未分化状态保持良好的MSCs.方法:收集不同周龄大鼠骨髓细胞;以不同浓度Percoll密度梯度离心分离骨髓单个核细胞;以60%低糖DMEM40%MCDB201为基础培养基,培养24h去悬浮细胞;以不同接种密度传代培养;碱性磷酸酶染色和油红O染色考察MSCs向骨和脂肪组织分化的潜能.结果:采用57%Percoll液的分离效果优于70%Percoll液.6周龄(体重约180g)大鼠能在细胞分离的质和量上达到最佳效果.24h进行悬浮细胞去除、5×103/cm2接种密度传代培养,光镜和电镜显示MSCs增殖能力强,功能状态活跃,成脂成骨实验显示多向分化潜能保持良好.结论:优化大鼠周龄、分离液的密度、细胞培养条件及改进培养方法有助于获得多向分化潜能保持良好的均一的MSCs.     

利用慢病毒载体构建稳定过表达人VEGF_(165)的小鼠巨噬细胞系

目的:通过构建人血管内皮生长因子165(humanVEGF_(165),hVEGF_(165)的慢病毒载体,感染小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,建立稳定高表达人VEGF165的小鼠巨噬细胞系。方法:将聚合酶链反应(PCR)扩增得到的hVEGF_(165)和慢病毒载体pLVX-IRES-ZsGreen1双酶切后连接,构建慢病毒表达载体pLVX-hVEGF_(165)-IRES-ZsGreen1。再经双酶切和测序鉴定后,进行病毒包装及浓缩。将该慢病毒载体感染RAW264.7细胞,利用绿色荧光蛋白ZsGreen1进行2次流式分选。用Realtime-PCR、WesternBlot分别检测各组细胞中hVEGF165的mRNA和蛋白表达;ELISA分别检测细胞上清中人VEGF和小鼠VEGF的含量。结果:酶切及测序结果示慢病毒表达载体pLVX-hVEGF165-IRES-ZsGreen1构建正确;流式分选后得到高纯度的ZsGreen1-hVEGF_(165)-RAW264.7细胞。Realtime-PCR、WesternBlot显示该细胞特异高表达hVEGF_(165)基因和蛋白(P均0.01)。ELISA显示该细胞分泌人和小鼠VEGF均显著增加(P均0.01)。结论:成功构建hVEGF_(165)慢病毒表达载体,并建立稳定高表达hVEGF_(165)的小鼠巨噬细胞系。为深入研究该细胞的功能、机制及应用提供充足稳定的细胞来源。     

EV71诱导人神经细胞SH-SY5Y自噬的分子机制

【背景】EV71感染所致的重症手足口病易导致神经系统并发症,使患儿预后较差,甚至死亡。【目的】从EV71可诱导神经细胞自噬这一现象出发,探索该病毒诱导神经细胞自噬的miRNA机制,探讨EV71损伤神经细胞可能的分子机制。【方法】通过RT-PCR及Westernblot技术,在感染EV71病毒的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y中检测细胞自噬变化;通过芯片分析细胞感染前后差异表达的miRNA分子,再使用miRNA mimics调节工具明确与EV71诱导神经细胞自噬有关的miRNA分子。【结果】EV71可诱导SH-SY5Y细胞自噬增加,下调细胞内miRNA29b(miR29b)分子的表达水平;当上调细胞内miR29b的表达后,EV71诱导细胞自噬增加的现象可被逆转,病毒复制水平下降。【结论】EV71诱导神经细胞自噬是通过下调miR29b分子的表达水平实现;miR29b不仅与自噬相关,它与EV71病毒复制也存在密切关系。因此,该研究不仅有助于阐明EV71导致神经系统损伤的具体分子机制,还为miR29b成为治疗EV71感染可能的新药物靶点奠定了理论基础。