Anti-HIF-1α-pEGFP重组质粒的构建及表达

目的构建EGFP-HIF-1α反义重组质粒,转染人宫颈癌Hela细胞,用以探讨HIF-1α蛋白在宫颈癌的生长、转移中的作用。方法应用基因重组技术构建EGFP-HIF-1α反义重组质粒,通过脂质体介导将其转染入Hela细胞,倒置荧光显微镜观察转染效果,Western blot检测HIF-1α蛋白的表达。结果酶切鉴定结果显示含EGFP-HIF-1α反义重组质粒构建成功,并能在Hela细胞中封闭HIF-1α蛋白的表达。结果 EGFP-HIF-1α反义重组质粒构建及转染成功,封闭Hela细胞中HIF-1α蛋白的表达,为进一步研究HIF-1α蛋白在宫颈癌的生长、转移中的作用提供试验基础。     

西地那非抑制低氧肺血管内皮向平滑肌样细胞的转分化及其机制

目的探讨低氧条件下肺动脉内皮细胞(PAECs)向平滑肌样细胞的转分化及西地那非(sildenafil)对其的作用和可能机制。方法经免疫磁珠法(用血小板内皮细胞粘附分子PECAM-1做免疫分选标记)纯化分离的原代肺动脉内皮细胞,分为常氧组(含21%O2,5%CO2和74%N2)、低氧组(含1%O2,5%CO2,94%N2)、常氧 sildenafil组和低氧 sildenafil组。分别培养1d和7d。免疫荧光检测平滑肌特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)的表达,结合形态学鉴定平滑肌样细胞的转分化;用逆转录-聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测myocardin mRNA的表达。结果(1)免疫荧光结果显示低氧7d组PAECs中α-SM-actin阳性率(2.07‰±0.06)(P<0.05)明显增高,阳性细胞呈梭形或多角形,而常氧组和低氧1d组均未见α-SM-actin的阳性表达;(2)RT-PCR显示myocardin mRNA的表达在低氧7d组(0.23±0.03)(P<0.05)明显增高,常氧各组和低氧1d组均未检测出其表达。(3)用sildenafil后,平滑肌样细胞的转分化率明显低于对应低氧7d组(1.02‰±0.05;P<0.05);Myocardin mRNA水平也明显降低(0.09±0.02)(P<0.05)。结论低氧可促进PAECs向平滑肌样细胞的转分化,sildenafil在一定程度上可抑制其转分化,其可能机制是通过抑制myocardin基因的表达而实现的。     

FAS在子宫内膜样腺癌及其癌前病变中的表达及意义

目的研究脂肪酸合成酶(Fatty acid synthase FAS)在子宫内膜样腺癌及其癌前病变中的表达以及与临床病理意义。方法 37例子宫内膜样腺癌、21例子宫内膜非典型增生、23例子宫内膜复杂性增生、17例子宫内膜单纯性增生及11例增生期子宫内膜中FAS的表达情况,结合临床病理参数并进行统计学分析。结果 FAS在子宫内膜样腺癌、子宫内膜非典型增生、子宫内膜复杂性增生、子宫内膜单纯性增生及增生期子宫内膜中均有表达,其阳性表达率依次为81.1%、57.1%、56.5%、52.9%、45.5%。子宫内膜样腺癌中FAS的阳性表达率明显高于增生期子宫内膜、子宫内膜单纯性增生、子宫内膜复杂性增生及子宫内膜非典型增生(P<0.05)。FAS的阳性表达率在浸润深度≥1/2肌层的子宫内膜样腺癌明显高于浸润深度<1/2肌层者(P<0.05)。FAS的表达与年龄及组织学分级无显著差异性(P>0.05)。在子宫内膜样腺癌中FAS的表达与ER有关(P<0.05)结论本研究提示FAS的表达可能与子宫内膜样腺癌的发生、发展有关。FAS可以作为提示子宫内膜样腺癌预后的一个新的参考指标。部分ER阳性的子宫内膜样腺癌的发生、发展可能与FA...     

原发性子宫颈恶性黑色素瘤1例并文献复习

目的 探讨1例原发性子宫颈恶性黑色素瘤（primary malignant melanoma of the cervix, PMMC）的临床病理学特征、鉴别诊断、治疗及预后。方法 应用HE染色、免疫组织化学染色对武汉市中心医院收治的1例PMMC的临床病理特点及免疫表型进行分析,并进行相关的国内外文献复习。结果 大体标本呈乳头状,色暗红,局灶灰黑,大小4 cm×4 cm;镜下见不规则巢团样排列的肿瘤细胞弥漫浸润子宫颈壁,肿瘤细胞主呈上皮样,胞质较丰富,核多形较明显,少数细胞可见清晰核仁,未见明显色素颗粒;免疫组织化学表型：S-100、SOX-10、melan-A、MiTF弥漫强阳性,p16、vimentin阳性,CD34、D2-40示脉管,Ki-67增殖指数约50%,HMB-45、PCK、p40阴性。结论 PMMC是一种恶性程度极高、临床上罕见的肿瘤,术前诊断主要依赖临床表现、病理活检及免疫组织化学染色结果。手术治疗为主,术后结合辅助治疗,预后差。     

细胞蜡块制作方法改良及在浆膜腔积液临床病理分析中的应用

目的研究并分析浆膜腔积液经多次反复离心及加固定液离心制作成细胞蜡块的成功率,并结合相关免疫细胞化学染色以验证其诊断的价值。方法选取临床怀疑恶性胸腹水的患者30例,胸腹水标本接收后放置半小时,倒掉部分上清液,剩余液体分批多次转移至同一个10 ml离心管中离心5min,2000 r/min、弃上清(一般反复转移离心5次),再加入10%的中性甲醛,2000 r/min离心5min,弃上清,此时细胞沉渣已经成小块状,取出块状细胞用滤纸包裹,装入包埋盒,放入10%的中性甲醛固定1h,然后脱水、浸蜡、包埋,制作成细胞蜡块、切片、HE染色。镜下观察细胞形态学,并结合相关的免疫细胞化学染色标记,确定胸腹水的性质及细胞来源。结果通过对细胞蜡块制作过程的改良,30例胸腹水细胞蜡块制作成功率达到100%,结合免疫细胞化学检测,对胸腹水的诊断率达到100%,且简单、经济、实用性强。结论通过对细胞蜡块制作过程的改良,并结合相关的免疫细胞化学染色检查有助于诊断晚期难以取得病理活检组织的浆膜腔积液的性质及来源,尤其针对基层病理科而言,该方法既实用又经济,值得推广。     

P16^（INK4α）及Ki67在正常宫颈、慢性宫颈炎及宫颈上皮内瘤变中的表达及意义

目的探讨联合检测P16^INK4α、Ki67的表达在子宫颈上皮内瘤变（CIN）中的诊断价值。方法用免疫组化S-P法对10例正常宫颈、20例慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ各30例中P16^INK4α和Ki67的表达进行检测。结果P16^INK4α在CIN的阳性表达明显高于与正常宫颈和宫颈慢性炎症组织中的表达,差异有显著性意义（P〈0.05）。ki67在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ的表达三者比较差异有显著性意义（P〈0.05）。结论P16^INK4α在判断是否有宫颈上皮内瘤变（CIN）时具有很高的特异性和敏感性,结合Ki67标记可以准确判断CIN级别。联合检测P16^INK4α和Ki67可以作为判断慢性宫颈炎与CIN的客观指标。