韭菜病毒分离物初步鉴定

韭菜病毒分离物初步鉴定房德纯,王振东,佟成富,陆庆轩（沈阳农业大学植保系,沈阳１１０１６１）（辽宁省风沙地改良利用研究所,阜新１２３０００）（沈阳市园林科学研究院,沈阳１１００１５）关键词韭菜病毒病,毒原鉴定,韭菜萎缩病毒１９９３年在辽宁省阜新市韭菜...     

烟叶脉坏死病毒原鉴定及cDNA克隆与序列分析

田间采集辽宁地区烟叶脉坏死病标样所得分离物,在测定的１２个科３５种植物中只侵染茄科的一些烟草品种及洋酸浆（ｐｈｙｓａｌｉｓｆｌｏｒｉｄａｎａ）,可由桃蚜（Ｍｙｚｕｓｐｅｒｓｉｃａｅ）传播。病叶汁液稀释限点（ＤＥＰ）为１０￣（－２）－v１０￣（－３）;失毒温度（ＴＩＰ）为５５一６０℃;体外保毒期（Ｌ）为４８－７２小时。病毒粒体形态呈线条状７２０×１２ｎｍ,病叶脉坏死部细胞质中含风轮状内含体。病毒提取物的紫外最大吸收为２６５ｎｍ,最小吸收为２４５ｎｍ,Ａ＿（２８０）／Ａ＿（２６０）为０．８２。该病毒分离物与ＰＶＹ￣０抗血清呈阳性反应。以病毒ＲＮＡ为模板,按国外报道的ＰＶＹ￣Ｎ序列合成引物经逆转录合成ｃＤＮＡ。用ＰＣＲ扩增出约０．８０ｋｂ的ＣＰ基因片段,将这一片段插入载体ｐＧＥＭ７Ｚ－ｆ（＋）中转化Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５ａ菌株得到了ＣＰ基因的克隆。ｃＤＮＡ序列分析表明,和国外报道的ＰＶＹ￣Ｎ序列同源性极高,初步表明引起辽宁地区烟叶脉坏死病的毒原为ＰＶＹ￣Ｎ。     

茄子花叶病新毒原

１９９１年从沈阳地区茄子花叶病叶片中分离到了ＳＹ－Ｉｓ分离物。经汁液摩擦接种７个科１６种植物,这一分离物可浸染４个科８种植物,但不侵染黄瓜、两葫芦和蚕豆,也不能经桃蚜和萝卜蚜传播。该分离物体外抗性的致死温度（ＴＩＰ）为９０－９５℃;稀释限点（ＤＥＰ）为１０￣（－６）－１０￣（－７）;体外保毒期（Ｌ）为一个月以上。光学显微镜下可见晶状胞质内含体。叶滴法电镜观察可见大小为±３００×１８ｎｍ的杆状病毒粒子。该病病叶汁液与烟草花叶病毒（ＴＭＶ）普通株抗血清呈明显阳性反应。用ＴＭＶ的一对引物进行多聚酶链反应（ＰＣＲ）,可扩增出一特异性核酸片段。根据上述实验结果,我们认为引起沈阳地区茄子花叶病的毒原种类为ＴＭＶ,是茄子花叶病的新毒原。     

辣椒的烟草蚀纹病毒(TEV)鉴定初报

近年来辣椒病毒病在辽宁省各地发生较为普遍。为了弄清毒原种群,几年来,在我组鉴定出主要毒原为烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(CMY)的同时,又在从沈阳地区采集的21份标样中,鉴定出分离物6号,系烟草蚀纹病毒(TEV),这是在辣椒花叶病中检测出的一个新的毒原。辣椒分离物6号在以下的指示植物上,经摩擦接种后,叶面表现为:在辣椒上叶片呈黄化斑驳,心叶稍细长,有时叶肉并有微细蚀纹斑,植株略矮。在心叶烟上表现斑驳花叶,在普通烟(黄苗榆)叶上现蚀纹。在昆诺藜叶上生局部枯斑。在曼陀萝叶上生明脉和花叶。在百日草上生花叶症。在千日红和马铃薯上无症。采用其他原抗血清反证的方法,进行血清学反应测定,它对TMV、CMV、PVX、PVY的抗血清均无沉淀反应。采用辣椒6号分离物病叶,以叶浸蘸法,作电镜观察,病毒粒体为线状,长约730nm。病毒汁液体外三常规测定,其钝化温度约为55℃(10分钟);稀释限点为10~(-4);体外存活期5—6日(20℃)。因此初步认为它是侵染辣椒的烟草蚀纹病毒(TEV)。