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目的:研究一株自制的c-erbB-2单克隆抗体A18在乳腺癌中表达的特性。方法:应用免疫组织化学SP法、蛋白质印迹分析法和荧光激活的流式细胞分选检测技术检测A18在635例乳腺癌组织、100例癌旁乳腺组织、不表达c-erbB-2的NIH/3T3(鼠成纤维细胞)和NE91(转表皮生长因子受体基因的NR6鼠成纤维面积)细胞株及高表达c-erbB-2的T6-17(转c-erbB-2-基因的NIH/3T3细胞)和SKBR3(人乳腺癌细胞)细胞株中的表达状况,并与市售进口c-erbB-2抗体(MaximBiotech产品)进行了平行对照研究。A18系采用细胞表面区域表位包埋法免疫小鼠制备而成,,结果:A18阳性染色定位于细胞膜,部分伴微弱的细胞浆着色,无明显非特异性染色,A18和进口抗体对NIH/3T3、NE91细胞均呈阴性,T6-17、SKBR3细胞均呈阳性,在乳腺癌组织中,A18的阳性率为60.3%,明显高于癌旁乳腺组织的5.0%,A18与进口同类单抗的阴性、阳性及总符合率分别为84.0%、82.8%及83.2%,与进口同类多抗的阴性,阳性及总符合率分别为88.0%、90.2%和89.5%。A1和进口同类单抗与乳腺癌临床病理特征的关系一致。经反复冻融7次或4℃保存10个月A18效价仍保持在3μg/ml。结论:A18特异性强,定位准确,效价高而稳定、可用于临床乳腺癌的检测。 相似文献
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前文我们报道了广西产金环蛇蛇毒中类心脏毒素a 及b 的分离。本文就它们的物理化学性质作了进一步研究。二种毒素氨基酸组成十分相似,通过凝胶过滤,测得它们的分子量分别为15,900和12,100。它们N 端的二个氨基酸顺序完全相同,为Gly·Leu…。经羧肽酶A降解测得它们的C 端顺序为……Ala·Cys·Tyr。等电聚焦测得它们的等电点分别为8.8和9.2。紫外吸收光谱显示它们279nmE_(1厘米)~(1%)分别为11.7和12.7。 相似文献
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透明质酸合酶3(hyaluronan synthase 3,HAS3),是一个参与透明质酸合成的酶分子,在上皮形成和肿瘤转移等过程中起重要作用.为了进一步研究HAS3基因的转录调控机制,本研究克隆鉴定了HAS3基因的启动子.首先应用5′RACE(rapid amplification of cDNA ends,cDNA末端快速扩增)技术鉴定了HAS3基因的转录起始位点,发现了丰度和转录起始位点不同的两种新的HAS3基因剪接变异体.通过PCR定向克隆策略,构建了覆盖HAS3基因5′端侧翼区起始密码子ATG上游约4.3 kb区域的一系列HAS3基因启动子荧光素酶报告基因重组体.启动子活性分析表明,HAS3基因启动子定位于转录起始位点附近约450 bp的区域内.转录因子结合位点分析表明,HAS3基因启动子缺乏典型的TATA盒,但含有典型的GC盒以及C/EBP等其它潜在的转录因子结合位点. 结果提示,Sp1和C/EBP等转录因子可能参与HAS3基因的转录调控. 相似文献
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慢病毒介导的RNA干涉对乳腺癌SKBR3细胞HER2受体的下调及生长抑制 总被引:4,自引:1,他引:3
大约30%的乳腺癌中有表皮生长因子受体家族蛋白HER2的过表达,此类癌症的预后差,恶性程度高。RNA干涉(RNAi)是最近发展起来能特异性抑制哺乳动物细胞中基因表达的新技术。本文在以往获得的能够产生良好基因沉默效应的小干涉RNA(siRNA)的基础上,构建了U6和H1双启动子siRNA表达载体,并转染HER2高表达乳腺癌SKBR3细胞定量测定了其HER2下调效应。随后,siRNA表达盒经LR重组反应被克隆入慢病毒载体中,在成功包装成病毒后,感染SKBR3并经荧光定量PCR、蛋白印迹杂交和流式细胞仪一系列实验证明慢病毒介导的RNAi确实能有效地下调肿瘤抗原HER2的表达。细胞长期增殖实验表明经慢病毒处理后细胞生长得到抑制。我们的研究为进一步阐明HER2与癌症恶化的关系以及发展新的基因治疗药物提供了工具和可能。 相似文献
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7号淀粉酶链霉菌M1033菌株木糖异构酶晶体结构研究 总被引:1,自引:0,他引:1
7号淀粉酶链霉菌M1033菌株木糖异构酶(SDXyI).19nm分辨率晶体结构已经解出.晶体空间群为I222,晶胞参数为a=9.884nm,b=9.393nm,c=8.798nm.参考锈赤链霉菌木糖异构酶(SRXyI)的晶体结构模型,通过分析晶体密堆积关系和晶体学R因子搜索,获得了SDXyI晶体结构的初始模型.采用PROLSQ软件包使用0.60~0.19nm分辨率衍射数据对模型进行了修正.最终模型的晶体学R因子为0.177,键长键角均方根偏差分别为0.0019nm和2.1°.与SRXyI相比较,SDXyI整体构象未发生明显变化,活性中心构象有显著差异. 相似文献
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沙打旺胚性原生质体培养优化及高频再生植株 总被引:6,自引:1,他引:6
外植体类型和光照条件决定沙打旺胚性愈伤组织的形成。用生长10d的胚性愈伤组织可分离到1.2×106个/g(原生质体/细胞),活力超过80%。当原生质体以1.0×105/mL的植板密度培养在含0.6%琼脂糖附加1.5mg/L 2,4-D、0.5mg/L BA和0.5mol/L葡萄糖的培养基(无机盐降为1/4)中,植板率为16.8%。条件培养基显著促进原生质体的生长发育。长大的细胞克隆经2周4℃低温处理后转到含0.1mg/L NAA和1.0mg/L BA分化培养基上,体细胞胚胎发生频率高达70%,每克细胞产生的体细胞胚数在200个以上。成熟的体细胞胚转到无激素的1/2MS培养基中即分化成苗,再生植株为正常的二倍体。 相似文献
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以双引物法对葡萄糖异构酶(GI)基因进行定点突变,将突变体基因于大肠杆菌中表达,获得了GI双点突变体GIK253RA198C.研究K253R和A198C双点突变对GI的结构和性质的作用,结果表明GIK253RA198C的热稳定性明显下降,最适反应温度降低5℃.文章从结构和机制上解释了为何同是K253R突变,对SM33 GI和密苏里游动放线菌GI的热稳定性产生不同的影响,认为这是由于Lys253在两种GI结构的位置上存在微小差异,从而使引入的Arg对亚基间的相互作用产生了相反效应所引起. 相似文献
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目的:探讨蛋白质组学技术在研究AdIL-24抗宫颈癌CaSki细胞作用机制的应用价值。方法:前期研究已成功构建AdIL-24,可抑制宫颈癌CaSki细胞生长,促进凋亡。在此基础上,通过双向凝胶电泳分离AdIL-24处理前后细胞总蛋白,并对胶条(pH3-10NL、pH4-7)、SDS-PAGE浓度(10%、12%)、电泳时间(6h、7h)进行优化,PDQuest图像分析,MALDI-TOF质谱鉴定,经Mascot、MS-fit软件查询SWISS-PORT数据库鉴定差异蛋白。结果:获得分辨率高、重复性好的CaSki细胞双向电泳图谱,质谱鉴定的差异蛋白点经Mascot、MS-fit软件搜索到同一种蛋白质。结论:已建立的蛋白质组学技术,为进一步研究AdIL-24的抑癌机制奠定基础。 相似文献
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