家蚕质多角体病毒片段IV的全序列测定

在随机引物建库的基础上,通过交叉设计引物及加单链DNA接头,应用RT-PCR技术克隆的家蚕质多角体病毒dsRNA片段Ⅳ的全长cDNA,并测定了它的全序列。该片段长3,262bp,含有一个完整的开放讯码框,编码一个长1,058氨基酸的成熟多肽。序列分析表明,该片段与日本BmCPV片段Ⅳ的核苷酸序列同源性为89％,氨基酸序列同源性为95％。     

嗜水气单胞菌外膜蛋白基因ompTS的高效表达及其免疫原性

根据嗜水气单胞菌外膜蛋白基因ompTS的核苷酸序列设计引物,运用聚合酶链式反应（PCR）扩增出与预期大小相符的基因片段。将此基因片段克隆至质粒pRSET A的BamHI和EcoRI位点,构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21（DE3）,经IPTG诱导获得高效表达,SDS－PAGE蛋白电泳表明在39．9kD处出现超强特异带,占总蛋白的51％。以Ni-NTA-Conjugate抗体进行Western blot分析证明该39．9kD的蛋白为所表达的融合蛋白。纯化融合蛋白注射雄性新西兰大白兔可诱导产生特异抗体。ELISA和Western blot检测结果显示,该抗体与表达的融合蛋白和从嗜水气单胞菌中提取的36．9kD外膜蛋白均呈阳性反应,表明所表达的融合蛋白仍保持原有外膜蛋白的免疫原性,为此融合蛋白作为 疫苗的候选成份提供理论基础。