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在大肠杆菌中建立了一套用于测定DNA聚合酶在PCR过程中复制精确性的系统,并测定了耐热FDDNA聚合酶在PCR扩增过程中的复制精确性。这一系统主要包括以质粒pUC118和pUC119为出发质粒所构建的一套共6个突变质粒,分别为pFDFP118和pFDFP119(+1移码突变)、pFDFM118和pFDFM119(-1移码突变)、pFDFU118和pFDFU119(碱基置换突变)。这些突变质粒均不能进行lacZ-α互补反应,因此在含有X-Gal和IPTG的培养基上菌落呈白色。同时还构建了PCR产物克隆载体pFDFL118和pFDFL119。以上述突变质粒为模板进行PCR反应,取反应产物和pFDFL118或pFDFL119连接后转化到大肠杆菌中。若在PCR过程中发生回复突变,则转化子在含有X-Gal和IPTG的培养基上呈蓝色。由转化子中蓝白菌落个数即可计算出DNA聚合酶的复制差错率。用这一系统测得FDDNA耐热聚合酶的复制差错率为10-5~10-6。 相似文献
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