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重组尿激酶型纤溶酶原激活物受体在酵母系统中的表达及鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
构建截断型可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体(u-PAR)的原核及酵母表达质粒并分别在大肠杆菌和Pichiapastoris酵母中高效表达.利用PCR扩增截断型可溶性u-PARcDNA片段,并分别连入酵母及原核表达载体中,构建成表达质粒.后者经诱导表达的蛋白被用于免疫家兔,获得抗u-PAR的抗血清,用于对酵母表达产物的鉴定.前者在甲醇的诱导下表达,产物分泌至培养液中.结果表明,原核表达的u-PAR蛋白免疫家兔后获得高效价的抗血清,利用此抗血清所作Westernblot证实酵母表达蛋白具有u-PAR的免疫原性,表观分子量40kD左右.Mut-表型在第5d为最高(2.5μg/ml),Mut+表型在第4d为最高(7.5μg/ml).因此,构建的可溶性u-PAR表达质粒在Pichiapastoris酵母细胞获得表达,为进一步竞争拮抗受体功能的研究奠定了基础. 相似文献
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本方法参照 Kanda 等人方法作了以下改进:用市售针剂型活性炭作为 BrdU 的载体,省去了繁杂的制备过程,节省了人力和物力;用 Adler 方法制备精原细胞染色体标本,可获得较多的中期分裂相,便于观察分析,以 UPO技术代替 FPG 技术处理玻片,使标本不易褪色,便于保存且节省了昂贵的荧光试剂。实验结果表明:改进后的小鼠体内 SCE 方法经济、简便,易操作,效果良好。 相似文献
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