RNAi抑制过氧化物酶基因Rsprx1表达促进萝卜花青素的积累

过氧化物酶是一类广泛存在于生物中的氧化还原酶,被认为参与植物花青素的代谢．本实验利用RNAi技术,干扰萝卜过氧化物酶基因Rsprx1表达. 结果表明, RNAi干扰载体的萝卜植株中过氧化物酶基因(Rsprx1)表达被抑制,过氧化物酶活性显著降低,过氧化物酶同工酶条带减少|而花青素含量在处理第9 d达到最大值|花青苷种类和含量有较大变化: 天竺葵素-3-阿魏酰葡糖苷-5-丙二酰基葡糖苷、天竺葵素-3-ρ-香豆酰二葡糖苷-5-丙二酰基葡糖苷、天竺葵素-3-阿魏酰二葡糖苷-5-丙二酰基葡糖苷和天竺葵素-3-二ρ-香豆酰二葡糖苷5-丙二酰基葡糖苷含量升高; 天竺葵素-3-二葡糖苷-5-葡糖苷、天竺葵素-3-葡糖苷-5-葡糖苷和天竺葵素-3-酰化二葡糖苷-5-葡糖苷含量降低|花青素合成相关基因（Chs、Chi、Dfr、F3h和Ldox）及转录因子（Tt8）的mRNA表达水平在RNAi处理后早期有明显上调．这些结果均表明,萝卜过氧化物酶Rsprx1参与花青素的合成代谢．     

RNAi抑制萝卜过氧化物酶基因的效果受光照影响

农杆菌介导的RNAi技术已广泛应用于研究植物基因的功能.本实验应用小块萝卜肉质根体外培养,探讨光照对干扰萝卜过氧化物酶基因Rsprx1表达的影响.结果表明,干扰萝卜过氧化物酶基因Rsprx1表达后,抑制组中过氧化物酶活性显著低于对照组,光照减弱RNAi的抑制作用;抑制作用始于浸染后4 h, 过氧化物酶活性减低时,花青素含量增加,但光照增加花青素含量;HPLC结果显示,与对照组比,抑制组中花青素苷种类和含量有较大差异;花青素合成相关基因（RsCHS、RsDFR和RsLDOX）的mRNA水平在处理后明显上调.此外,过氧化氢酶活性和H2O2含量相应升高.由此表明,光照可影响农杆菌介导的RNAi效果,干扰萝卜过氧化物酶基因Rsprx1表达可以通过影响花青素合成相关基因的表达和过氧化氢含量,从而影响花青素代谢.     

鳌虾血细胞中一种新的astakine样造血因子基因的克隆及表达

甲壳动物的血细胞参与多种免疫反应,能够激活酚氧化酶原,产生抗菌肽或进行血细胞的封装、吞噬等. 本研究在克氏原螯虾血细胞中发现一种造血激素astakine,是与脊椎动物细胞因子前动力蛋白prokineticin同源的基因,命名为PcAst,该基因的开放阅读框为357 bp,编码118个氨基酸,具有保守的半胱氨酸残基. 半定量PCR结果显示,该基因只在血细胞中表达. 实时荧光定量PCR结果显示,在金黄色葡萄球菌和鳗弧菌刺激后,其mRNA表达量大幅上调. 白斑综合征病毒刺激后,该基因也呈持续上调表达趋势. 为进一步研究其功能,重组表达了PcAst蛋白,并对其蛋白水平表达模式进行了分析. 所有结果表明,该基因可能参与鳌虾血细胞的固有免疫应答反应,在抗细菌和抗病毒中起重要作用.