内皮素1的克隆表达及其诱发抗体的初步研究

目的：克隆内皮素1（endothelin 1,ET1）基因、表达ET1融合蛋白,以期诱导机体产生ET1抗体,中和患者体内过量的ET1。方法：根据人ET1的多肽序列合成ET1基因,将其插入到pThioHisA的EcoRI和 SalI位点,重组质粒pThioHisA-ET1进行酶切鉴定及序列测定验证后转化TOP10,IPTG诱导的重组菌经SDS-PAGE检测融合蛋白Thioredoxin-ET1的表达量;表达的融合蛋白用ProBond亲合层析纯化并经HPLC鉴测其纯度;每只小鼠按25、50、100ug/次剂量的Thioredoxin-ET1每两周免疫一次,共4次,最后一次免疫10d后制备抗血清,经Western blot和ELISA检测证明Thioredoxin-ET1融合蛋白具有ET1免疫反应原性。结果：经过质粒酶切鉴定及序列分析表明,构建了正确的融合表达载体pThioHisA-ET1,用1mmol IPTG诱导工程菌,融合蛋白Thioredoxin-ET1的表达量占菌体总蛋白的50%,多以包涵体的形式存在,包涵体经洗涤,变性和复性后,用ProBond亲合层析纯化得到了Thioredoxin-ET1融合蛋白,经HPLC鉴测其纯度为90%。制备的抗血清中ET1抗体的效价可达104。结论：应用Thioredoxin-ET1融合蛋白可以诱发机体产生ET1抗体,为研究ET1在患者体内的过量表达及对患者的免疫治疗开辟了新的途径。