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为了研究人成骨细胞刺激因子(Human osteoblast-stimulating factor,OSF-1)的生物学活性,构建OSF-1高效毕赤酵母表达菌株并表达纯化具有生物活性的OSF-1。首先通过全基因人工合成的方法合成人osf-1基因,并克隆至毕赤酵母分泌表达载体pPIC9K,构建重组表达质粒pPIC9K/osf-1,线性化后电转化酵母宿主菌GS115,构建P.pastoris GS115/pPIC9K/osf-1,经MD、G418-YPD平板和PCR法筛选,获得多拷贝转化子。阳性表达菌株在25℃,经1%的甲醇诱导表达96 h,重组蛋白的表达量达到最大。经SDS-PAGE电泳分析所表达的重组蛋白约为18 kDa,与人成骨细胞刺激因子相符。表达上清经SP-Sephadex C-50离子交换层析进行纯化,得到纯度达98%以上的OSF-1。Western blotting鉴定该蛋白对人成骨细胞刺激因子抗体具有良好的抗原性。生物活性测定表明提纯的OSF-1能促进鼠成骨细胞MC3T3-E1的增殖和分化。利用重组毕赤酵母高效分泌表达了有生物活性的OSF-1,为进一步开展其抗骨质疏松活性研究及产业化开发奠定了基础。 相似文献
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急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺外分泌细胞中hsp70基因的表达 总被引：2，自引：0，他引：2
给大鼠胆胰管内逆行注射牛磺胆酸钠制备急性坏死性胰腺炎动物模型,采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交及免疫组织化学方法检测了ｈｓｐ７０基因在胰腺外分泌细胞中的表达。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析发现,术后１ｈ即出现ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ的高表达,然后开始下降,术后８－１６ｈ恢复至对照组水平。免疫组织化学检测发现,术后１ｈ即可见明显的ＨＳＰ７０蛋白染色,２ｈ最强,然后开始减弱,一直持续至１６ｈ,仍高于对照组水平;阳性染色位于腺泡细胞顶部并呈大颗粒状,而基底部、细胞核及腺泡腔内未见阳性信号。推测急性胰腺炎时胰腺外分泌细胞高表达ｈｓｐ７０基因,可能与其参与大量合成的胰酶的转运及抑制胰酶激活等保护作用有关。 相似文献
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