大肠埃希菌—双歧杆菌穿梭表达载体的构建及白介素-10基因的表达

目的构建能够在大肠埃希菌和双歧杆菌中穿梭表达目的基因的载体,并用此载体在大肠埃希菌和双歧杆菌中表达人白介素-10基因（hIL-10）的蛋白产物;为hIL-10基因重组双歧杆菌治疗炎症性肠病做前期准备。方法以质粒pDG7为模板扩增pMB1片段,构建表达质粒pET28B1。用PCR法扩增hIL-10基因,将此目的基因以及pET28B1经酶切后用连接酶连接,形成重组质粒pET28B1-hIL10。pET28B1-IL10转染大肠埃希菌BL21和长双歧杆菌。最后用Western blot检测hIL-10基因在大肠埃希菌和长双歧杆菌中的表达情况。结果pET28B1-hIL10阳性克隆扩增后提取质粒并进行基因测序,结果显示插入片段为hIL-10,序列正确且无突变。hIL-10基因在大肠埃希菌、长双歧杆菌中的诱导表达产物通过Western blot检测验证为IL-10蛋白,显示该hIL-10表达载体在大肠埃希菌阳性克隆中经诱导可高量表达,在长双歧杆菌体中有少量表达。结论成功构建质粒pET28B1,该质粒能够在大肠埃希菌和双歧杆菌中穿梭表达目的基因hIL-10。     

多层螺旋CT联合血清淀粉酶、脂肪酶、D-二聚体、糖蛋白2对急性胰腺炎的诊断价值研究

摘要 目的：研究多层螺旋CT（MSCT）联合血清淀粉酶（AMY）、脂肪酶（LPS）、D-二聚体（D-D）、糖蛋白2（GP2）对急性胰腺炎（AP）的诊断价值。方法：选取2019年1月～2022年1月我院收治的89例AP患者,记作研究组。另取同期健康体检人员80例作为健康组。对所有AP患者均开展MSCT检查,并分析相关影像学特征。比较两组血清AMY、LPS、D-D及GP2水平。以受试者工作特征（ROC）曲线分析明确MSCT联合血清AMY、LPS、D-D及GP2诊断AP的效能。结果：AP患者的MSCT影像学表现特征明显,且急性水肿型胰腺炎体积普遍正常或呈轻度增大,可见均匀强化,胰腺轮廓清晰或模糊。而急性坏死性胰腺炎以胰腺体积显著增大为主,可见不均匀强化,形态规则性较差,胰腺轮廓模糊。在血清AMY、LPS、D-D及GP2水平方面对比,研究组均高于健康组（均P＜0.05）。经ROC曲线分析发现,MSCT联合血清AMY、LPS、D-D及GP2诊断AP的曲线下面积（AUC）、灵敏度、特异度以及约登指数均高于上述五项单独诊断。结论：MSCT联合血清AMY、LPS、D-D及GP2诊断AP的效能较佳。