协同激活分子CBP诱饵表达质粒的构建和鉴定

构建协同激活分子CBP（CREB（cAMP response element binding）binding protein）的诱饵表达质粒pGBKT7-CBP并检测其蛋白表达、毒性和自激活作用.PCR扩增小鼠CBP的基因编码序列（CDS（coding sequence）序列）并克隆入诱饵表达载体pGBKT7中,通过酶切和测序鉴定后,把构建好的诱饵表达质粒pGBKT7-CBP转化到酵母AH109细胞中,Western blot检测诱饵蛋白表达情况,同时检测诱饵蛋白的毒性和自激活作用.结果成功扩增了小鼠CBP基因的CDS序列,并成功克隆到酵母诱饵表达载体pGBKT7中,测序结果正确.诱饵表达质粒成功转化到酵母AH109细胞中,Western blot分析结果证实酵母细胞高表达诱饵蛋白CBP,但诱饵蛋白有自激活作用.提示pGBKT7-CBP不能用于酵母双杂交或三杂交系统检测CBP与其他蛋白质或小分子的相互作用,对其他研究CBP生物学功能试验的方法选取具有一定的借鉴意义.     

布地奈德对人气道上皮9HTEo-细胞增殖的影响及机制

探究布地奈德(budesonide,BUD)对人气道上皮9HTEo-细胞增殖的影响及机制,利用CCK-8法检测BUD对9HTEo-细胞增殖的影响,荧光显微镜观察经BUD处理后9HTEo-细胞形态的改变,流式细胞术检测细胞周期分布变化,Western blot检测p27kip1蛋白表达.CCK-8法结果显示3～10 μmol/L BUD对细胞具有显著的抑制作用(P＜0.01);荧光显微镜下,1～10 μmol/L BUD处理后细胞可见明显的增殖受抑、凋亡形态;流式细胞术检测G0/G1期细胞随着BUD浓度的增加而增多,S期细胞逐渐减少;Western blot检测结果提示BUD能使p27kip1表达增加.由此可见,BUD对人气道上皮细胞株9HTEo-具有显著增殖抑制作用,其作用与提高p27kip1蛋白的表达,将细胞阻滞在G0/G1期有关.     

汞中毒患者尿中性粒细胞明胶酶脂质相关运载蛋白的含量及其意义

目的：检测汞中毒患者尿中性粒细胞明胶酶脂质相关运载蛋白（U－NGAL）的含量,探讨其在汞中毒早期肾损伤中的意义。方法：以24例我科收住院患者为汞中毒组、无汞接触史的15例健康成人为对照组,分别进行临床体检并测定尿－N－乙酰－D－葡萄糖苷酶（U－NAG）、24h尿蛋白定量（UPQ）、尿β2微球蛋白（U－β2－MG）、尿α1微球蛋白（U－α1－MG）、尿汞（U－Hg）、血汞（B－Hg）、血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）,排除既往肾脏病史,ELISA法测定U－NGAL含量,并分析上述结果。结果：汞中毒组B－Hg、U－Hg、U－NAG、UPQ、U－β2－MG、U－α1－MG、U－NGAL与对照组相比均有统计学差异（P〈0．05）,传统指标Ser、BUN与对照组相比无统计学差异;U－α1－MG、U－β2－MG、U－NAG、UPQ、U－NGAL与B－Hg均有相关性,且相关系数逐渐递增。结论：长期汞接触可造成肾功能损害,U－α1－MG、U－β2－MG、U－NAG、UPQ、U－NGAL可作为汞中毒肾早期损害的敏感指标,且灵敏性依次递增;U－NGAL可能比U－NAG早出现。