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以A/Swine/Guangdong/LM/2004(H1N1)猪流感病毒HA基因为模板,通过RT-PCR技术扩增出HA基因,并将其克隆到pCI-neo真核表达载体中,成功构建重组表达质粒pCI-HA,瞬时转染vero E6和293T细胞,通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(Immunoperoxidase monolayer assay ,IPMA)、间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay, iIFA)和蛋白免疫印迹（Western blot,WB）实验证明,HA基因能够在哺乳动物细胞中有效表达并具有良好的生物学活性。将重组质粒三次免疫8w雌性Balb/c小鼠后,ELISA试验和中和试验结果表明该重组质粒能够诱导小鼠产生较高的抗体滴度,并具有良好的中和活性。因此为H1亚型猪流感DNA疫苗的研究奠定了理论基础。 相似文献
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对灵芝(赤芝)进行了原生质体的形成和再生实验,研究了渗透压稳定剂、菌龄、酶解条件对原生质体分离的影响,以及渗透压稳定剂、培养基对原生质体再生的影响;另外还尝试用电穿孔法在灵芝原生质体中进行报告基因(reportgene)β-gal的转化,结果β-gal在菌丝体中有表达。
Abstract:The experiments of protoplasts preparation from Lingzhi (Ganoderma lucidum) and their regeneration were done and the effects of osmotic stabilizer,age of mycelium and lystic conditon on formation and regeneration of protoplasts were studied.The β-geo gene has been transformed into the protoplast by electroporation and the reporter gene β-gal has been expressed in the regenerated hypha. 相似文献
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构建了小鼠MT－Ⅱ基因的定位整合载体pMT－Ⅱ6.7,这是一个置换型载体,它包含了6．7kb的与MT－Ⅱ基因及其旁侧序列同源的序列。用电穿孔方法将这一载体转化入小鼠ES细胞Mespu22中,在G418R、GancR的双抗性克隆中,用PCR方法进行筛选,从104个克隆中获得26个阳性克隆;对这26个克隆进行核型分析表明,其中有2个克隆,即克隆5－2和8-4的核型（2n=40,XY）正常率很高,达到84％和88％;进一步用Southern杂交分析,结果证明,在MT－Ⅱ基因位点确实发生了定位整合事件。利用这两个克隆的细胞进行体内、体外分化实验表明,它们具有体内、体外分化能力,进一步进行了嵌合体的制作,现已获得用克隆8-4细胞制作的嵌合体小鼠。 相似文献
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