小鼠Spata3蛋白结构和功能的生信分析及初鉴

目的 对小鼠精子发生相关蛋白3(spermatogenesis associated protein 3,Spata3)的序列进行分析,探讨其结构和功能。方法 利用NCBI数据库比对小鼠Spata3的同源性、ExPASy ProtParam软件分析理化特征、SOPMA及GOR4预测空间构象、NetPhos3.1及STRING数据库分析蛋白修饰位点及蛋白间相互作用关系等信息、免疫组化和免疫荧光染色检测其组织细胞定位。结果 小鼠和人的Spata3基因CDS序列64%相同,是碱性不稳定亲水蛋白,无信号肽,属于非跨膜的胞内蛋白,主要定位于睾丸组织各级精子细胞核和胞质,以圆形精子细胞表达量最高。小鼠Spata3含1个内在无序区结构域,30个潜在的磷酸化位点,11个潜在的O-型糖基化位点,可能与Spata46、Spert等蛋白相互作用。结论 小鼠Spata3是精子发生过程中的保守蛋白,可能调节精子发生变形过程。     

C57BL/6J小鼠脂肪组织总RNA提取及周脂素基因的克隆

目的用改进后的方法提取高质量的RNA,以此为模板,应用T-A克隆法克隆C57BL/6J小鼠周脂素基因编码区,对其进行测序验证,并与GenBank比对。方法在试剂说明书基础上,改进提取脂肪组织RNA的方法,从C57BL/6J附睾脂肪组织提取高质量的总RNA,用RT-PCR扩增出周脂素编码区基因,并将目的基因编码区克隆入pMD18-T载体中,转化E.coli JM109后,筛选阳性克隆,通过限制性内切酶酶切鉴定后,对其进行测序验证,并与GenBank比对。结果用改进后的方法成功提取出了高质量的总RNA,并且成功提取构建的重组载体中含有周脂素基因的全长序列,与GenBank公布的序列一致。结论改进的后的脂肪组织RNA提取方法是可行的,并获得周脂素基因的cDNA,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。     

中国地鼠山医群体近交系E繁殖性状的遗传力估计

目的对中国地鼠山医群体近交系E的一些繁殖性状进行遗传力估计分析。方法采用平均信息约束最大似然法（AIREML）,利用WOMBAT软件进行处理。结果产仔数、离乳数、胎间隔2-1和胎间隔3-2的遗传力均较低,分别为0.05、0.096、0.182和0.116。结论中国地鼠山医群体近交系E繁殖性状的遗传力均属于低遗传力。     

FUT1基因多态性及其与产仔性状的关联性研究

采用PCR-RFLP技术6个中外品种共245头猪的FUT1基因进行了研究, 结果表明, Hin 6Ⅰ位点上, 大白猪、长白猪和杜洛克猪3个外来猪种均存在多态, 且以敏感型(GG型和AG型)居多; 山西黑猪、太原花猪和马身猪3个本地猪种的所有检测样品都表现为GG型。用方差分析方法分析FUT1基因型、品种和胎次与产仔性状之间的关系, 基因型和品种对猪的总产仔数的影响显著, 胎次对总产仔数影响不显著。而基因型、品种和胎次对产活仔数影响均不显著。     

AQP1真核表达载体的构建及其在FRT细胞的表达

目的：构建小鼠AQP1基因真核表达质粒并观察其在FRT细胞中的表达。方法：采用RT—PCR方法从小鼠肾脏组织的总cDNA中扩增出小鼠的AQP1基因,采用基因重组技术将AQP1的cDNA片段插入真核表达载体pCAGGS,构建小鼠AQP1的真核表达质粒,脂质体转染FRT细胞进行表达。结果：酶切和测序结果证实AQP1真核表达质粒构建成功,经脂质体转染FRT细胞后,免疫荧光检测证明AQPI蛋白在真核细胞中成功表达。结论：成功构建真核表达质粒pCAGGS—AQP1-myc,并在FRT细胞中得以表达。为进一步研究小鼠AQP1过表达时的功能及机制奠定了实验基础。     

中外六个猪种FUT1基因多态性研究

目的对6个中外猪种共245头猪的FUT1基因进行了研究。方法采用PCR-RFLP技术。结果与结论Hin6I位点上,大白猪、长白猪、杜洛克猪3个外来猪种均存在多态,且以敏感型（GG型和AG型）居多;山西黑猪、太原花猪、马身猪3个本地猪种的所有检测样品都表现为GG型。     

MiR-31转基因小鼠的构建及其在组织器官的表达

目的 构建稳定过表达的miR-31转基因小鼠,检测其主要组织器官中miR-31的表达变化情况并对在体miR-31过表达的应用提供合格的工具鼠。方法 使用Gateway cloning技术构建miR-31过表达载体,使用DNA显微注射技术将构建好的载体注入受精卵内,随后转移至假孕母鼠内,待其自然生产。将新生小鼠提取尾部DNA,PCR及琼脂糖凝胶电泳鉴定miR-31过表达阳性小鼠,筛选阳性小鼠并饲养繁殖。另取阳性小鼠,提取主要组织器官的miRNA并使用RT-PCR检测其miR-31的表达量。同时对比阳性小鼠和野生型小鼠神经系统中Nestin的表达和神经干细胞的数量。结果 成功构建了miR-31过表达转基因小鼠,并在屏障环境下饲养繁殖至14代以上。各主要组织器官miR-31的表达均升高且稳定表达。阳性小鼠Nestin的表达和神经干细胞数量均高于野生型小鼠。结论 通过使用Gateway cloning技术成功构建了miR-31过表达转基因小鼠,且在各代小鼠中miR-31的表达稳定,神经系统内的神经干细胞数量多于野生型小鼠,可为进一步研究miR-31过表达后在体内的功能和神经系统疾病的治疗提供良好的工具小鼠。     

甘丙肽重构基因GAL（intronⅡ）的克隆及其过表达转基因载体的构建

目的克隆甘丙肽重构基因GAL（intronⅡ）,构建小鼠神经系统特异性表达甘丙肽（galanin,GAL）的转基因载体pUC18/PDGF-β-promoter/GAL（intronⅡ）,为制备GAL转基因小鼠做准备。方法通过常规PCR、RT-PCR及重叠延伸PCR（overlap extension PCR,OE-PCR）扩增出插入GAL第二内含子的GAL全长cDNA的重构基因GAL（intronⅡ）,将GAL（intronⅡ）克隆入T载体进行酶切、测序鉴定;同时从psisCAT6α中切下血小板源性生长因子β链（platelet-derived growth factor beta polypeptide,PDGF-β）启动子片段连接到空载体pUC18上构建出重组载体pUC18/PDGF-β-promoter;然后将GAL（intronⅡ）定向克隆于pUC18/PDGF-β-promoter下游,构建转基因载体pUC18/PDGF-β-promoter/GAL（intronⅡ）。结果 PCR和限制性内切酶分析鉴定,表明获得转基因载体pUC18/PDGF-β-promoter/GAL（intronⅡ）。通过对重构基因GAL（intronⅡ）的GALcDNA和第二内含子序列测序证实其与GenBank中的标准序列一致,GAL（intronⅡ）中第二内含子插入的位置准确,且无移码。结论使用重叠延伸PCR扩增重构基因GAL（intronⅡ）并成功构建转基因载体pUC18/PDGF-β-promoter/GAL（intronⅡ）,为转基因小鼠制备奠定一定的实验基础。