布鲁氏菌BP26抗原制备及基于BP26的金标检测试纸的初步研究

目的 制备布鲁氏菌血清学优势抗原BP26的原核表达,对其进行鉴定,且进行基于BP26重组蛋白的布鲁氏菌抗体金标检测试纸的研究。方法 检索人用疫苗株布鲁氏菌bp26基因序列进行基因合成,克隆至pET30a(+)载体,构建重组质粒pET30a(+)-bp26,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,亲和层析纯化BP26重组蛋白,纯化后重组蛋白进行蛋白免疫印迹鉴定。胶体金标记BP26,以BP26重组蛋白和BP26兔多抗血清分别包被检测线和质控线,制成布鲁氏菌抗体金标检测试纸。结果 BP26重组蛋白在大肠埃希菌中成功表达,相对分子质量约为26 000,与预期相符。亲和层析纯化后得到纯度较高的BP26重组蛋白。Western blot实验证明,该蛋白可与布鲁氏菌抗体阳性兔血清产生特异性结合。用布鲁氏菌抗体金标检测试纸检测兔阳性血清,检测线和质控线均显色明显。结论 成功获得BP26重组蛋白,Western blot实验证明该蛋白具有良好的免疫反应性。研制的检测试纸成功检测出布鲁氏菌抗体阳性兔血清。该蛋白为布鲁氏菌病诊断试剂盒研制及疫苗研发奠定了基础。