高效严谨型大肠杆菌Targetron基因打靶系统的构建

构建高效严谨型大肠杆菌Targetron基因打靶系统。将来源于pET28a的T7-lac操纵子与来源于pSY6的Ⅱ型内含子组装构建大肠杆菌IPTG诱导型Targetron质粒系统。以lacZ基因为例,选择lacZ-635s和lacZ-1063a两个位点为靶位点,利用构建的IPTG诱导型Targetron系统进行基因打靶,通过分析诱导前和诱导后Ⅱ型内含子在靶位点的插入效率,验证大肠杆菌IPTG诱导型Targetron系统严谨性和打靶效率。最后,通过优化诱导剂浓度及诱导时间,建立高效严谨的诱导型大肠杆菌Targetron基因打靶系统。在没有IPTG诱导时,Ⅱ型内含子在两个位点均不能插入,打靶效率均为0;当加入0.5 mmol/L IPTG诱导45 min时,其在lacZ-635s位点的打靶效率提高到90.8±5.5%,在lacZ-1063a位点的打靶效率提高到92.6±2.4%。成功建立高效严谨型大肠杆菌Targetron基因打靶系统,旨为Ⅱ型内含子的机理研究及应用奠定基础。     

胰岛素使用访谈工具在胰岛素治疗患者健康教育中的实施体会

目的评价胰岛素使用访谈工具在胰岛素治疗患者健康教育中的应用效果。方法选择68例住院期间首次接受胰岛素治疗的糖尿病患者,采用我对胰岛素的看法主副量表评估患者对胰岛素的认识和对胰岛素使用存在的障碍。针对患者表述的问题,评估患者当前存在的1~2个主要障碍,宣教护士在《专业访谈手册》找到相对应的讲解资料,给予分析与解读,找出讨论要点对患者进行访谈,每次访谈约30min。访谈结束后比较健康教育前、后患者对胰岛素的认识及治疗的接受程度。最后为患者制定个体化胰岛素治疗方案。结果患者对使用胰岛素治疗存在不同程度的认知误区和使用障碍;使用胰岛素访谈工具教育前、后患者对胰岛素的优点、认知、生活管理、态度、胰岛素注射相关问题、不良反应、费用等方面均有明显差异（P〈0.05）结论胰岛素使用访谈工具是以访谈模式协助医护人员与患者进行有效沟通,纠正了糖尿病患者对胰岛素治疗的认知误区,提高了糖尿病患者胰岛素治疗的依从性,是临床开展糖尿病胰岛素使用健康教育的一个优化工具。     

副溶血性弧菌外膜蛋白K的B细胞线性表位预测

目的预测副溶血性弧菌外膜蛋白K(OmpK)的B细胞线性表位。方法 NCBI下载已登录的OmpK的基因序列,对其进行生物信息学分析,应用DNAStar protean软件综合分析OmpK蛋白的二级结构、柔性、表面可能性、亲水性和抗原指数等多种参数,预测其B细胞线性表位。结果 OmpK蛋白的优势B细胞线性表位位于肽链的第7-13、25-36、63-69、140-147、182-188、234-239区段。结论预测得到OmpK蛋白的6个优势B细胞线性表位,为进而克隆表达串联表位蛋白,研制副溶血性弧菌多表位疫苗奠定基础。     

L1.LtrB内含子编码蛋白反转录结构域关键催化位点分析及功能验证

【目的】筛选影响Ll.LtrB内含子编码蛋白(Intron encoded protein,IEP)反转录功能的关键催化位点,并获得无反转录活性的IEP突变体。【方法】首先,利用NCBI数据库,通过序列比对及同源建模方法筛选影响IEP反转录功能的关键氨基酸催化位点;然后,对筛选获得的关键催化位点进行定点突变,同时以Targetron载体为模板,构建无反转录功能的突变型Targetron打靶系统;最后,以大肠杆菌lacZ基因为例,体内验证IEP突变体的功能及其对Ⅱ型内含子"归巢"效率的影响。【结果】筛选到C164和G214两个位点是影响内含子编码蛋白反转录功能的关键氨基酸残基,并获得C164K和G214W两个突变体。体内功能分析表明,此两个位点突变完全失活了Ⅱ型内含子的"归巢"功能。【结论】筛选并获得了失活反转录功能的Ll.LtrB内含子编码蛋白突变体,为深入研究Ⅱ型内含子的结构和"归巢"机理奠定了基础。     

阴道用乳杆菌活菌胶囊在宫颈癌前病变LEEP术后应用价值的临床研究

目的 研究阴道用乳杆菌活菌胶囊在宫颈癌前病变LEEP术后应用的临床价值。方法 采用前瞻性对照研究方法,将符合纳入标准的168例研究对象,按照试验组和对照组1:2的比例随机分配,试验组56例,对照组112例。两组对象的平均年龄、孕次和产次相比,差异均无统计学意义（Ps>0.05）。两组对象在LEEP术后第1、2、3月在非经期用阴道内重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊（80万IU每晚一粒,阴道用药,连用10天）;试验组在术后第4、5、6月在非经期用阴道用乳杆菌活菌胶囊（0.25 g每晚一粒,阴道用药,连用10 天）,对照组在术后第4、5、6月不用任何药物,LEEP术后第7月两组研究对象在月经干净后3~7 d内复查。研究高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）、细菌性阴道病、阴道微生态指标的阳性率在两组之间的差异。结果 在LEEP术后第7月,试验组和对照组的HR-HPV阳性率（19.64%和37.50%）,细菌性阴道病（BV）阳性率（0.00%和12.50%）,微生态四项指标（pH值>4.5、唾液酸苷酶、过氧化氢和白细胞酯酶）全部异常阳性率（0.00%和9.82%）相比较,差异均具有统计学意义（Ps<0.05）。结论 在宫颈癌前病变LEEP术后,可以应用阴道用乳杆菌活菌胶囊改善阴道微环境,减少细菌性阴道病的发生,促进阴道内微生态平衡,以降低HR-HPV的持续阳性率。     

以Real-time PCR方法检测耐药幽门螺杆菌中HefABC基因的表达

为了探讨耐药幽门螺杆菌(Helicobacter. pylori)主动外排系统hefA、hefB、hefC基因表达与菌株克拉霉素耐药、阿莫西林耐药以及多重耐药的关系,随机选择H. pylori克拉霉素耐药株、阿莫西林耐药株、敏感株、多重耐药株各10株,利用Real-time PCR方法检测HefABC系统的表达,以成组t检验法对敏感株与各耐药株之间mRNA表达水平进行比较。结果显示,hefA在敏感组、克拉霉素耐药组、阿莫西林耐药组、多重耐药组中的mRNA表达量以2-ΔΔCt表示,分别为0.903 9±0.154 07、1.482 2±0.378 5、1.278 0±0.206 2、2.255 7±0.289 2,克拉霉素耐药组与敏感组比较:t=4.489,p0.05;阿莫西林耐药组与敏感组比较:t=4.631,p0.05;多重耐药组与敏感组比较:t=13.11,p0.05。hefB在敏感组、克拉霉素耐药组、阿莫西林耐药组、多重耐药组中的m RNA表达量以2-ΔΔCt表示,分别为0.075 9±0.015 7、0.636 1±0.162 3、0.906 4±0.127 6、1.149 2±0.305 8,克拉霉素耐药组与敏感组比较:t=10.86,p0.05;阿莫西林耐药组与敏感组比较:t=20.42,p0.05;多重耐药组与敏感组比较:t=11.09,p0.05。hefC在敏感组、克拉霉素耐药组、阿莫西林耐药组、多重耐药组中的m RNA表达量以2-ΔΔCt表示,分别为0.128 2±0.054 5、1.319 4±0.272 4、0.683 0±0.185 0、3.480 2±0.932 6;克拉霉素耐药组与敏感组比较:t=13.56,p0.05;阿莫西林耐药组与敏感组比较:t=9.096,p0.05;多重耐药组与敏感组比较:t=11.35,p0.05。研究结果证实,H. pylori中外排系统hefA、hefB、hefC的高表达与菌株对克拉霉素耐药、阿莫西林耐药及多重耐药均有关。