盐穗木过氧化氢酶基因的克隆与功能分析

利用同源基因克隆法,从新疆荒漠盐碱地多年生灌木盐穗木(Halostachys caspica)中克隆获得盐穗木过氧化氢酶基因(HcCAT1)。序列分析表明,HcCAT1基因开放阅读框为1 479 bp,编码492个氨基酸,推测编码蛋白质的分子量为56.7 kD,等电点为6.84。基因序列比对发现,HcCAT1与多种植物过氧化氢酶基因具有较高的同源性。半定量RT-PCR结果表明,HcCAT1基因受盐胁迫而上调表达。将构建的重组质粒pET32a-HcCAT1转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导重组蛋白His-HcCAT1的表达;SDS-PAGE和Western印迹检测显示,重组蛋白的分子量大小为77.7 kD,其大小与推测的大小一致;在低温诱导下以可溶性形式表达,且表现出一定的过氧化氢酶活性。盐胁迫实验结果显示,在添加400 mmol/L NaCl、400 mmol/L KCl以及300 mmol/L甘露醇的LB培养基中,重组质粒转化菌的生长情况和生长速率明显优于对照,表明HcCAT1可明显提高大肠杆菌的耐盐性。该研究结果将有助于从抗氧化角度认识盐生植物盐穗木的耐盐分子机理。     

双峰驼凝乳酶原基因的生物信息学分析

通过生物信息学的方法对双峰驼凝乳酶原基因及相应的氨基酸序列的同源性、理化性质、保守结构域、亚细胞定位、信号肽、跨膜结构域、亲水性/疏水性、二级结构进行预测分析.结果表明,双峰驼凝乳酶原基因开放阅读框全长1 146 bp,编码381个氨基酸,属于胃蛋白酶A超家族,预测定位于内质网（膜）的稳定亲水性蛋白,具有一个16个氨基酸的信号肽,其不含跨膜结构域.无规卷曲是其二级结构中最大量的结构元件,α螺旋和延抻链分散于整个蛋白质中,活性位点的分析表明,编码蛋白有6类活性位点.分析双峰驼凝乳酶原基因及其编码蛋白质的特征,能够为深入开展双峰驼凝乳酶的表达和凝乳特性研究提供理论依据.     

环境因素对短命植物抱茎独行菜抽薹开花节律的影响

以新疆十字花科典型早春短命植物抱茎独行菜(Lepidium perfoliatum L.)为材料,分别在不同环境、不同土壤基质及不同春化时间下栽培,以探讨环境因素对抱茎独行菜抽薹开花的影响。结果表明:抱茎独行菜种子在蛭石∶珍珠岩(3∶1)中的出苗率显著高于营养土和自然生境土壤,基质对抱茎独行菜植株是否抽薹无显著影响,但影响其抽薹的早晚及结实特性;人工4℃春化对3种不同栽培环境中于阳台生长植株的抽薹有明显促进作用,而对培养室及户外环境中栽培植株是否抽薹无显著影响;抱茎独行菜抽薹开花对光照和温度的响应最明显,光照时间由短变长与苗期一定时间的低温之间的相互作用是促使抱茎独行菜抽薹开花的关键因素。     

新疆短命植物小拟南芥耐盐性的初步研究

利用种子萌发及石蜡切片等方法对新疆短命植物小拟南芥(Arabidopsis pumila)在盐胁迫下种子的萌发率及植株生长发育的变化进行了研究,结果显示:(1)盐胁迫对小拟南芥种子萌发具有抑制作用,当去除盐分后,部分种子能够重新萌发.(2)盐分影响幼苗的形态及内部结构,低盐(50 mmol/L)时,幼苗基生叶较大且数量增加;叶中栅栏组织细胞大,排列舒展;根中导管数量明显增多,植株生长健壮而旺盛;而较高盐(150 mmol/L)时,叶片变小增厚,色深绿,底部叶变黄白色,叶中栅栏组织细胞窄小,排列紧密;根中导管数急剧下降,植株生长受到明显抑制.(3)盐胁迫对成株期植株的高度、花序轴长、角果数等性状都有显著影响,但在NaCl浓度达500 mmol/L时,植株仍然存活且有一定的结实率,显示此时的耐盐性比萌发期和幼苗期有显著提高.研究表明,小拟南芥从幼苗至成株期耐盐性逐渐增强,该特征与其对自然生存环境的适应相关.     

花花柴Na+/H+反向运输载体的表达和抗血清制备

文章建立了检测耐盐植物功能基因抗体制备和蛋白表达的方法。     

一种快速筛选有效RNAi片段的方法

目的:介绍一种快速筛选有效RNAi片段的方法.方法:构建CC趋化因子配体2(chemokine(C-C motif)ligand 2,CCL2)的表达载体、干涉载体和检验载体;计算检验载体的绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞率;Real-time PCR检测干涉载体的干涉效果;计算PH 72h和168h转基因大鼠的肝再生率.结果:检验载体及其对照在24h表达GFP的细胞数最多,其中检验载体CCL2-CCL2(255)在各时间点的表达量均最低;Real-time PCR结果显示干涉载体CCL2(255)干涉效果较好;表达载体CCL2-N1能提高转基因大鼠PH 168h的肝再生率,达105%,而干涉载体CCL2(255)仅78%,与对照均有显著差异.结论:将靶基因和干涉片段构建到同一个载体上,通过观察、计算GFP的表达量可快速筛选有效RNAi片段,此法高效经济、省时省力.     

植物中microRNA的合成及在发育和抗逆中的作用

介绍了植物microRNA（miRNA）的结构、合成、作用机制及其在植物生长发育和逆境胁迫中作用的研究进展。     

水稻NHX1基因启动子和C末端的调控功能研究

为了解水稻Na+/H+逆向转运蛋白(OsNHX1)在植物应答非生物胁迫中的分子调控机制,采用RT-PCR方法克隆OsNHX1基因上游2 000bp的启动子序列,并通过基因枪轰击瞬时转化洋葱表皮细胞,检测不同非生物胁迫下启动子的活性和表达模式;同时,分别克隆全长和C末端缺失的OsNHX1基因,通过花序浸染法转化拟南芥,研究OsNHX1基因及其C末端的功能。结果显示:OsNHX1启动子受逆境胁迫诱导,在盐、干旱、脱落酸胁迫处理下GUS表达活性明显升高;过表达OsNHX1的转基因拟南芥中,种子萌发率、根长、丙二醛含量和相对含水量的测定结果均显示其胁迫耐受性得到改善,但过表达OsNHX1C末端缺失基因对转基因植株的胁迫耐受性无明显影响。研究表明,Na+/H+逆向转运蛋白有助于提高植物耐盐性,且其C末端区域对该转运蛋白活性的发挥具有关键作用。     

单域抗体与抗感染免疫

随着分子生物学技术的发展及抗体研究的不断深入,单域抗体(single domain antibodie,sdAb)的研究已成为肿瘤靶向治疗研究领域的热点之一。作为实验研究和治疗应用的重要工具与制剂,单域抗体在调节免疫功能,中和毒素和抗微生物感染等方面具有广阔的应用前景。     

中林美荷杨叶柄的组织培养及植株再生

1植物名称中林美荷杨(Popuuls sp.). 2材料类别当年生嫩枝叶柄. 3培养条件分化培养基:(1)MS 6-BA 0.4 mg·L-1(单位下同);(2)MS 6-BA 0.4 NAA 0.05.壮苗培养基:(3)MS 6-BA 0.2 NAA 0.1 GA 0.2.生根培养基:(4)1/2MS IBA 0.2;(5)1/2MS IAA1.0.以上除生根培养基外均加入蔗糖3.0%,生根培养基加蔗糖1.5%和琼脂0.7%,pH 5.8～6.0.培养温度26～28℃,光照时间16 h·d-1,光照度1 600lx.