新的生长激素释放激素类似肽Pro-hGHRH(1-44)-Gly-Gly-Cys的重组和比较活性*

目的:为了寻找高活性和长半衰期生的GHRH类似肽。方法:通过使用独特的酸敏感水解位点Asp-Pro的原核表达系统,构建了新的Pro-hGHRH(1-44)-Gly-Gly-Cys类似肽。通过重组细菌裂解、包含体洗涤、乙醇分级沉淀、酸水解、SP-Sephadex C-25和Sephadex G-10柱层析等技术,纯化了高纯度的Pro-hGHRH(1-44)-Gly-Gly-Cys肽。通过使用SDS-PAGE、离子化质谱、雌大鼠垂体和人流产胎儿垂体,测定了多肽的纯度、分子量、生长激素释放活性。结果:Pro-hGHRH(1-44)-Gly-Gly-Cys肽分子量5373Da与实际值吻合,0.1~10 μg/ml的肽剂量不论是对人垂体还是大鼠垂体都增加了垂体生长激素的释放,大鼠垂体生长激素的释放具有剂量依赖性。与标准的hGHRH(1-40)肽比较,新的类似肽有较高的GH释放活性。结果也显示了,Pro-GHRH(1-44)-Gly-Gly-Cys与Pro-hGHRH(1-44)肽的GH释放活性无统计学差异。结论：新的类似肽有较好的生长激素释放活性、功能选择性和种属特异性。     

原蛋白转变酶的生物化学结构与功能

肽或者蛋白质以前体形式合成后,需要原蛋白转变酶,和/或羧基肽酶,酰胺化酶等加工酶的协同作用才能获得完全的生物活性。原蛋白转变酶是这个过程中最重要的功能酶,它们由9种Ca2+依赖性的蛋白内切酶组成,许多重要的生理过程需要它们的直接参与,如肽与蛋白质激素、膜受体和病毒外壳蛋白的成熟等。它们的功能与许多疾病相关,如癌症、脑卒中、糖尿病、脂代谢紊乱等疾病,该文对原蛋白转变酶的生化结构和功能作一简述。     

鼠源原蛋白转化酶2基因的构建及其表达

目的:蛋白转化酶PC2在神经内分泌肽的成熟过程中起到了非常重要的作用,为了研究鼠肿瘤膜型中pc2基因对乳腺癌生长转移的影响,重组并构建了鼠源pc2基因.方法:提取大鼠脑垂体总RNA,通过RT-PCR方法克隆并扩增了鼠源pc2的cDNA.将pc2基因的cDNA插入pCDNA3.1/Zeo载体构建成pCDNA3.1-pc2重组载体.通过pCDNA3.1-pc2或和它的分子伴侣基因7b2的共表达,pc2基因成功地在乳腺癌4T1细胞株中表达和活化.结论:通过测序、转染、Western blot分析和活性测定等证实pc2被插入载体并在哺乳动物细胞中成功表达.