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人硫氧还蛋白在大肠杆菌中的高效表达、纯化及对内毒素血症小鼠的保护作用 总被引:4,自引:0,他引:4
为了对人硫氧还蛋白hTRX功能及其在休克治疗前景进行评价 ,将PCR扩增的hTRX基因连入pKPL 4载体 ,转化大肠杆菌pop2 136 .通过两步离子交换柱分离得到纯化的蛋白 ,进一步观察其稳定性及在体外对NFS 6 0和MCF 7细胞的促增殖活性 .结果发现 ,TRX蛋白可明显促进去细胞因子诱导的NFS 6 0细胞增殖和撤血清后MCF 7细胞的增殖 ,并发现外源性TRX可明显对小鼠内毒素血症起保护作用 . 相似文献
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杀虫遗传工程荧光假单胞菌IPP202部分生物学特性 总被引:5,自引:0,他引:5
对遗传工程荧光假单胞菌IPP202进行了质粒稳定性检
测、抑菌活性测定、在棉花根部和叶面定殖能力分析、杀虫蛋白抗紫外能力检测及田间杀虫
活性测定等试验。结果表明,工程菌与出发菌株P303相比,其抑菌、定殖等有益于植物的优
良特性未发生显著变化;经过连续培养和连续稀释培养后工程菌的质粒都非常稳定;广波长
紫外线照射2 h后,苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)由于裸露的伴
孢晶体杀虫蛋白受紫外线破坏因而杀虫活性大大下降,而荧光假单胞菌工程菌的活性变化不
大;IPP202田间杀虫活性与Bt野生菌株接近。工程菌有望解决Bt本身存在的杀虫蛋白多以裸
露晶体的形式存在而易受紫外线破坏的弱点,同时也发挥了P303菌株在多种植物上定殖能力
的优点,使其具有在植物周围大量繁殖而直到杀虫作用的优势。通过进一步研究,将有望构
建成更有实用价值的工程菌。 相似文献
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杀虫防病基因工程枯草芽孢杆菌的构建 总被引:21,自引:0,他引:21
分别以枯草芽孢杆菌大肠杆菌穿梭质粒pHB201和pRP22为载体,通过感受态转化方法,将Bt-HD-1杀虫蛋白基因cry1Ac导入了水稻纹枯病生防菌株枯草芽孢杆菌B916。工程菌株质粒酶切电泳分析、Southern印迹分析和杀虫生物活性测定结果证实了cry1Ac基因的导入及其在B916中的有效表达。抑菌测定证明工程菌株保持了原野生型菌株良好的抑菌活性。质粒稳定性分析表明以载体pRP22构建的工程菌株Bs2249具有良好的稳定性,而以载体pBH201构建的工程菌株Bs2014则不稳定。此外,实验还证实Bt基因的导入与表达对B916的生长没有不良影响。 相似文献
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苏云金芽孢杆菌CrylAb13基因的克隆及表达研究 总被引:7,自引:0,他引:7
BtC005是我国自行分离的对多种害虫具有毒杀作用的苏云金芽孢杆菌。经PCR-RFLP系统鉴定,它含有crylAb基因。Southern blot结果显示;PstI酶切C005质粒所得的8.5kb长的DNA片段为crylAb基因的阳性杂交带。以pUCP19为载体,克隆了该片段并证明其含有crylAb基因,对其进行亚克隆和测序,结果表明该基因编码区为3468bp,其编码的蛋白含1155个氨基酸,分子量为130.6kD,等电点为pH4.845。该基因已在GenBank基因库中注册,Accession number为AF254640,并为国际Bt杀虫晶体蛋白基因命名委员会正式命名为crylAb13。将crylAb13基因在Bt无晶体突变株cryB^-中表达,蛋白质电泳结果表明在130kD处有表达带,并证明GryAb对小菜蛾有较高的杀虫活性。 相似文献
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目的观察神经生长因子(NGF)及血管内皮生长因子(VEGF)在糖尿病大鼠下颌下腺内表达变化,探讨胰岛素对其表达影响及可能机制。方法 SD大鼠30只,随机分为:对照组、糖尿病组、胰岛素治疗组。大鼠2个月成模后,取血检测血糖;取下颌下腺组织,分别进行HE染色、免疫组织化学染色和计算机图像分析。结果①对照组血糖与糖尿病组比较差异有统计学意义;胰岛素治疗组血糖与糖尿病组比较差异有统计学意义。②糖尿病组腺泡轻度萎缩,排列不规则,颗粒曲管数目减少,直径变小;胰岛素治疗组较对照组变化不明显。③与对照组相比较,糖尿病组NGF表达下调,VEGF表达上调。与糖尿病组相比较,胰岛素治疗组NGF表达上调,VEGF表达下调。结论糖尿病大鼠下颌下腺内NGF表达减少、VEGF表达增高,可能是糖尿病患者神经病变与血管病变的重要原因之一;胰岛素治疗可能与NGF和VEGF的表达改变有内在联系。 相似文献
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糖皮质激素对肝细胞内游离钙的作用 总被引:2,自引:0,他引:2
应用钙离子荧光指示剂fura-2,对糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)是否影响肝细胞内游离钙(Intracellualar free calcium,[Ca^2+]i作了初步探讨,结果发现,GC在短期内能升高肝细胞[Ca^2+]水入1.0μmol/L的Cortiso0.25min即可引起肝细胞[Ca^2+]的明显升高,到10分钟时效应达高峰。此时与静息状态的肝细胞水平相比胞浆内游离钙 相似文献
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从培养时间、裂解溶液、抽提和沉淀时间等方面对苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)基因组DNA提取技术进行改进.提取8株对蛴螬有杀虫活性的野生Bt菌株的基因组DNA,分析其纯度,并进行PCR分析与酶切分析.试验结果表明,新的提取方法耗时36 min,明显短于旧方法所用时间(97 min);两种方法提取的基因组DNA A260/A280均大于1.8,无明显区别;琼脂糖凝胶电泳结果显示,上样量相同时,新方法提取的基因组DNA浓度是旧方法的5倍以上;新方法提取的基因组DNA能作为模板灵敏地扩增出测试基因,所提取的DNA能被限制性内切酶完全酶切,证明DNA具有很高的纯度.本研究改进的基因组DNA提取方法耗时短、产量高,并能满足PCR扩增、酶切等分子生物学需要. 相似文献
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[^3H]Cortisol及[^3H]Dexamethasone在大鼠肝细胞膜上的特异结合位点 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究应用[3H]cortisol和[3H]dexamethasone(DEX)两种配基,观察到大鼠肝细胞膜上存在一类糖皮质激素(GC)特异结合位点。这些位点与GC的结合具有饱和性、高亲和力及低容量。其平衡解离常数(Kd)分别为12.84±6.58nmol/L和40.27±23.44nmol/L;最大结合容量(Bmax)分别为2.57±1.84pmol/mg蛋白质与0.64±0.18pmol/mg蛋白质(cortisol,n=4;DEX,n=3;±SE)。动力学实验数据所得的Kd值与Scatchard分析所得的Kd值结果基本一致。[3H]cortisol和[3H]DEX饱和结合实验数据用Scatchard作图分析,均显示为直线。Hill系数则分别为0.9880和0.9990.竞争抑制实验结果表明,cortisol对[3H]cortisol的结合位点有高度特异性竞争,比其它几种类固醇(强的松、黄体酮、RU486、DEX)的竞争力至少强40倍以上.用放射自显影技术进行研究,也提供了[3H]cortisol特异结合银粒位于大鼠肝细胞膜上的依据。 相似文献