雀麦上雀麦腥黑粉菌Tilletia bromi的分子检测

雀麦是重要的牧草,近年来进口量激增。寄生于雀麦上的腥黑粉菌共有4种,即小麦矮腥黑穗菌Tilletia controversa(TCK)、雀麦腥黑粉菌T.bromi、T.bolayi和小麦网腥黑穗菌T.caries(TCT),根据冬孢子形态难以直接区分这些种类。本文在形态、自发荧光和萌发生理三方面的比较研究基础上,依据beta-微管蛋白tub2基因序列设计一套引物,转化为特异SCAR分子标记,建立了雀麦上T.bromi的菌丝基因组DNA的特异PCR检测方法和冬孢子的套式特异PCR检测方法,为病害提供了快速、可靠的检测方法。     

霍尔斯单轴霉的自体荧光现象

霍尔斯单轴霉Plasmopara halstedii(Farl.)Berl. et de Toni(向日葵霜霉病菌)离体孢囊梗和孢子囊,向日葵病株根、茎和叶片组织内的菌丝体和吸器受到热力胁迫后发出强烈自体荧光,而成熟向日葵果实的内果皮与种皮内的菌丝体和吸器则有明显自然自体荧光。该菌的自体荧光现象可用以改进向日葵植株和种子带菌检验技术。     

孔石莼(Ulya pertusa)凝集素的分离纯化及性质的研究

为抑制肿瘤细胞增殖和防治有关病害提供基础理论依据,将孔石莼(Ulva pertusa)经磷酸盐缓冲液抽提,20%～75%硫酸铵分级沉淀,牛甲状腺球蛋白-Sepharose 4B亲和层析,可以从绿藻孔石莼中纯化出孔石莼凝集素(UPL),在PAGE上显示单一蛋白染色带,在等电聚焦电泳上显示单一蛋白染色带,其pI为8.40.纯化后的UPL的最大紫外吸收峰在285 nm,用Sephadex G-200分子筛层析测得其分子量为11 047.该凝集素可以凝集人的A、B、AB、O型红细胞,且凝集活性相同,在对人(A、B、AB、O)兔、鲤、鲫的红细胞的凝集作用中,兔的凝集作用最强.该凝集素凝集兔红细胞的作用不被D-半乳糖、D-果糖、葡萄糖、蔗糖、甘露聚糖、γ球蛋白、卵清蛋白所抑制,仅被牛甲状腺球蛋白抑制,最小抑制浓度为6.20 g/L.该凝集素在pH4.0～10.14范围内均有活性,但在pH6.50～9.51范围内活性较高,该凝集活性在85℃加热1 h,活力仍未改变,说明具有很强的耐热性.     

Neotyphodium coenophialum和N.lolii的PCR检测

以N·coenophialum和N·lolii及其近似种N·huerfanum、N·chisosum、N·aotearoae、N·sp·共6个种18个菌株及苇状羊茅和多年生黑麦草8个品种的供试种子,通过对Tub-2基因引物IS1~IS3和NC25基因引物F1~R1进行扩增,设计了种子中Neotyphodium属内生真菌套式扩增的通用引物Tub-2-F~Tub-2-R,设计了N·coenophialum和N·lolii的特异引物F3~R3,建立了N·coenophialum和N·lolii的菌丝常规PCR和单粒种子套式PCR检测方法,使N·coenophialum和N·lolii的检测达到了单粒种子的水平,缩短了检测时间。建立的N·coenophialum和N·loliiPCR检测方法特异性强,结果可靠,检测速度快。     

同步分子检测两种腥黑粉菌近似种Tilletia bromi和T.fusca

早熟禾是优良的牧草和草坪草,近年来,从进境早熟禾上多次截获一种腥黑粉菌,但一直被鉴定为禾草腥黑粉菌Tilletia fusca。通过比较研究,作者已将该菌种名改为雀麦腥黑粉菌T.bromi。依据T.bromi和T.fusca的序列差异位点设计了6对引物,成功建立了适合菌丝检测的T.bromi和T.fusca的双重PCR方法和适合冬孢子检测的套式双重PCR方法,检测灵敏度达到10pg/μL,为早熟禾腥黑粉菌鉴定提供了快速、可靠的检测方法。     

从进口早熟禾种子中检出的一种腥黑粉菌与其近似种的比较

早熟禾是优良的草坪草和牧草,近年来,天津出入境检验检疫局多次从进境的草地早熟禾、加拿大早熟禾及一年生早熟禾上截获一种腥黑粉菌,暂名为Tilletia sp.。针对T. sp.、早熟禾上的形态相近的T. sterilis、T. togwateei,以及同属近似种雀麦腥黑粉菌T. bromi和禾草腥黑粉菌T. fusca在冬孢子形态特征、萌发特性及细胞学性状等方面进行了系统比较。结果表明,Tilletia sp.与T. sterilis、T. togwateei存在较大差异,与T. bromi和T. fusca差别不明显;截获菌与Tilletia sp.在菌瘿、冬孢子形态特征上与T. bromi更为接近,根据研究结果将Tilletia sp.定名为T. bromi。     

进境美国加州脐橙中丁香疫霉Phytophthora syringae的截获

从产自美国加利福尼亚州的新鲜脐橙样品中发现多个腐烂病果,通过分离培养得到3个疑似丁香疫霉Phytophthora syringae菌株,对3个菌株进行形态学研究、致病性测定和分子序列比对分析。结果表明病菌在V8A培养基上菌落稀疏、平铺,呈星状,菌丝紧贴培养基生长或埋于基质内生长;在PDA培养基上菌落呈菊花花瓣状,菌丝致密,乳白色;游动孢子囊和菌丝膨大体在无菌水和土壤浸出液中黑暗条件下48h后产生;菌株为同宗配合,卵孢子在带有新鲜脐橙果实组织或杜鹃叶片的V8A培养基中大量产生;创伤接种脐橙果实,7d后接种脐橙出现典型的褐腐症状;通用引物ITS1/ITS4扩增测序,Blastn分析表明序列与GenBank中P. syringae序列相似性为99%。依据上述研究结果,将分离获得的3株菌鉴定为丁香疫霉Phytophthora syringae,系国内首次截获的一种植物检疫性真菌病害。     

寄生霜霉Peronospora parasitica (Pers.)Fr.孢子囊萌发方式的观察

<正>寄生霜霉Peronospora parasitica(Pers.)Fr.主要为害十字花科植物,引起许多蔬菜及油菜的霜霉病,常造成严重损失,寄主范围较广,常见寄主有油菜、甘蓝、花椰菜、白菜、芥菜、萝卜等,是霜霉属最重要的种之一(陆家云2001;张中义等1986)。侵染白菜引起白菜霜霉病。白菜小苗被害时,初在叶背     

苇状羊茅内生真菌与多年生黑麦草内生真菌实时荧光PCR检测研究

苇状羊茅内生真菌Neotyphodium coenophialum和多年生黑麦草内生真菌N．lolii对美国、新西兰等国家的畜牧业曾经造成过巨大损失。以N．coenophialum和N．lolii及其近似种N．huerfanum、N．chisosum、N．aotearoae、N．sp．共6种18个菌株,以及苇状羊茅和多年生黑麦草8个品种种子为供试材料,根据Tub-2基因设计了通用Taqman探针及引物,根据NC25基因设计了N．coenophialum和N．lolii的特异Taqman探针及共用引物,通过通用探针的单色荧光PCR和特异探针的双色荧光PCR,建立了N．coenophialum和N．lolii的菌丝及单粒种子稳定可靠、特异性强的荧光PCR检测方法,检测灵敏度达到单粒种子,使检测时间由至少一个月缩短至7～8个小时。