产气肠杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶基因的克隆和表达及影响重组酶活性的因素

用PCR方法从产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)中克隆出09kb的DNA片段,经DNA测序证明是α-乙酰乳酸脱羧酶(α-acetolactate decarboxylase,α-ALDC)基因。将α-ALDC基因重组到质粒pBV220后,转化大肠杆菌,经筛选获得高效表达的重组子菌株。重组α-ALDC基因表达量占菌体总蛋白量的27%。酶活检测表明重组子细胞表达的α-ALDC活性是产气肠杆菌的12000倍。另外,粗提的重组α-ALDC的最适pH为6.5～7.0,pH稳定范围为5.5～8.0,适合的温度为35～45℃。Ba²⁺、Cd²⁺、Fe²⁺、Co²⁺、Mn²⁺、Sn²⁺可提高重组α-ALDC的活性。氨基酸修饰剂可降低其活性。     

重组α—乙酰乳酸脱羧酶的表达及部分酶学特性

用聚合酶链式反应方法以短芽胞杆菌基因组ＤＮＡ为模板,克隆出０．９７ｋｂ的ＤＮＡ片段,经ＤＮＡ测序证明α－乙酰乳酸脱羧酶基因。将该基因重组到质ｐＢＶ２２０中,构建了重组表达质粒ｐＢＶＹＩ,转化大肠杆菌ＤＨ５α后,经筛选得到了能表达０６３３－ＡＬＤＣ活性的转化子细胞。     

二种重组α-乙酰乳酸脱羧酶在啤酒生产中降低双乙酰的作用

利用已构建的含有短芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）和产气肠杆菌（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ　ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）α－乙酰乳酸脱羧酶（α－ａｃｅｔｏｌａｃｔａｔｅ ｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ, α-ＡＬＤＣ）基因的工程菌株,并使它们分别在大肠杆菌中高效表达,获得重组α－ＡＬＤＣ。在实验室,用 ２Ｌ体积的麦芽汁进行啤酒生产试验,添加 ２种重组α－ＡＬＤＣ后,使啤酒中的双乙酰含量快速下降到或始终保持在０.１ｍｇ／Ｌ以下。证明得到的重组ａ－ＡＬＤＣ能有效地降低啤酒中双乙酰含量。     

[A6-Ala,A11-Ala]-人胰岛素突变体的构建及其生物活性

利用 PCR技术 ,将胰岛素原基因中 A6和 A1 1的 Cys序列突变成 Ala序列 ,以去除 A链的链内二硫键 .突变基因连接到质粒 p BV2 2 0 ,构建了表达质粒 p JG40 3,并且在大肠肝菌中得到表达 .经过 Sephadex G- 50层析可得到纯化的突变人胰岛素原 ( Mut- HPI- Ala) .纯化产物用胰蛋白酶和羧肽酶处理 ,并经 Resource Q阴离子交换柱层析可进一步获得纯化的突变人胰岛素 ( Mut- HI- Ala) .Native- PAGE分析表明 Mut- HI- Ala的结构松散 .Mut- HPI- Ala的放射免疫活性和胰岛素受体结合活性是非突变人胰岛素原 ( Met- HPI)的 4.6%和 2 .4% .Mut- HI- Ala的放射免疫活性和胰岛素受体结合活性是非突变人胰岛素 ( Met- HI)的 4.3%和 4.6% .实验结果表明 ,胰岛素 A链内的二硫键对胰岛素的生物活性起着重要的作用     

醋酸杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶基因克隆、表达及在啤酒发酵中的作用

根据α－乙酰乳酸脱羧酶（α－ａｃｅｔｏｌａｃｔａｔｅｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ,α－ＡＬＤＣ）基因的碱基序列,用ＰＣＲ方法从醋酸杆菌（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒａｃｅｔｉ）中克隆出了０．９９ｋｂ的ＤＮＡ片段,经ＤＮＡ测序后证明该片段是α－乙酰乳酸脱羧酶基因．将该基因重组到质粒ｐＢＶ２２０中,转化大肠杆菌,筛选获得具有α－ＡＬＤＣ活性的重组子菌株．酶活检测表明,重组子细胞表达的α－ＡＬＤＣ活性是供体菌的１１００倍．将得到的α－ＡＬＤＣ粗提后用于啤酒发酵试验,降低了啤酒中双乙酰的含量     

虎眼万年青的直接体细胞胚胎发生和植株再生

以虎眼万年青(Ornithogalum caudatum Jacq.)子鳞茎的鳞叶为外植体,不经过愈伤组织阶段,直接诱导体细胞胚胎发生并再生植株。组织切片和扫描电镜的观察结果表明:体细胞胚来自鳞叶表皮最外层的单个细胞。这个细胞经第一次平周分裂,成为2-细胞原胚,然后依次经过4-细胞原胚、球形胚、香蕉形胚等阶段发育成小植株,其形态学发育过程与合子胚相似。小植株移入土中,1周后即可成活。此外,还观察到直接体细胞胚只产生于鳞叶的近轴面,而远轴面无体细胞胚产生,这两个部位在细胞结构和形态上有显著差异。     

二种重组α-乙酰乳酸脱羧酶在啤酒生产中降低双乙酰的作用

利用已构建的含有短芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）和产气肠杆菌（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ　ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）α－乙酰乳酸脱羧酶（α－ａｃｅｔｏｌａｃｔａｔｅ ｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ, α-ＡＬＤＣ）基因的工程菌株,并使它们分别在大肠杆菌中高效表达,获得重组α－ＡＬＤＣ。在实验室,用 ２Ｌ体积的麦芽汁进行啤酒生产试验,添加 ２种重组α－ＡＬＤＣ后,使啤酒中的双乙酰含量快速下降到或始终保持在０.１ｍｇ／Ｌ以下。证明得到的重组ａ－ＡＬＤＣ能有效地降低啤酒中双乙酰含量。     

虎眼万年青的快速繁殖

RapldPropopHonofDrni量ogal艺界mca已丞dalumYINDOng，HUANGBat－on（haitlaeof（lejle。ndqstaim，ha～A，ffe＊＊＊＊＊＊－t｝lzl；wrwi，CfollocmDz130024）1植物名称虎眼万年青（Drnitogalumcaudatum）。2材料类别子鳞茎。3塔共条件（l）MS＋NAA3．0ms／L（单位下同）＋6     

产气肠杆菌α—乙酰乳酸脱羧酶基因的克隆和表达及影响重组酶活性？…

用ＰＣＲ方法从产气肠杆菌（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）中克隆出０．９ｋｂ的ＤＮＡ片段,经ＤＮＡ测序证明是α－乙酰乳酸脱羧酶（α－ａｃｅｔｏｌａｃｔａｔｅ ｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ,α－ＡＬＤＣ）基因。将α－ＡＬＤＣ基因重组到质粒,ｐＢＶ２２０后,转化大肠杆菌,经筛选获得的高效表达的重组子菌株。