7TD1细胞及其克隆对IL-6的反应性和依赖性

比较了基础所和北医大提供的两株7TD1细胞。选择北医大细胞株进行克隆,筛选出对IL-6增殖反应性和依赖性较强的3株细胞(7TD1 MC1、7TD1 MC4、7TD1MC5)。其中,7TD1 MC5细胞的反应曲线呈典型的“倒S”形,对IL-6有很好的反应性和依赖性。MTT比色法显示了与~3H-TdR掺入法一致的结果,采用7TD1 MC5细胞及MTT比色法测定IL-6生物活性,可减少仪器测试的费用和避免放射性污染。确定了培养基中IL-6的最适浓度(2ng/ml)。细胞传代培养和冻存6个月,7TD1 MC5细胞对IL-6的反应性和依赖性均无明显变化。     

重组人表皮生长因子的中试工艺研究

人表皮生长因子(hEGF)是最早发现最早应用于临床的多肽生长因子之一,由53个氨基酸组成,分子量约为6200Da。它具有多种生物学功能,能促进表皮和上皮细胞的增殖,刺激多种培养细胞的生长,增强蛋白质及DNA合成等。在临床上主要用于创烧伤救治、皮肤     

E.coli HB101(pBV-IL-6)的流加分批培养及其产物纯化

E.coli HB101(pBV-IL-6)工程菌株的表达产物为N端缺失25个氨基酸残基的IL-6衍生物。通过摇瓶试验选定了培养基配方及pH值的控制范围,在5L发酵罐的半连续培养中确定了培养和诱导时间。在此基础上放大到30L发酵罐进行培养,结果表明,菌密度达到5.15g/L(干重),rIL-6衍生物占菌体总蛋白的34.8％。表达产物经过纯化和复性,纯度达95％以上(SDS-PAGE分析),采用依赖IL-6的小鼠杂交瘤细胞株7TD-1和~3H-TdR掺入法测定生物活性,rIL-6衍生物比活性为7.71×10~6U/mg。     

重组人表皮生长因子的纯化及体内活性检定

人表皮生长因子(Human Epidermal Growth Fac-tor,hEGF)是一个由53个氨基酸残基所组成的单链多聚肽,分子量为6200D左右,等电点为pH4.6。它具有多种生物学功能,是发现较早并且具有广泛的潜在应用价值的细胞因子之一。hEGF存在于多种体液中,由于它的含量很低,对于它的研究及应用起了限制作用。本实验室利用含有hEGF基因质粒的重组大肠杆菌,经过发酵得到了大量高效分泌表达的rhEGF,在此基础上,我们对它进行了分离纯化的研究,得到了纯度大于95％具有明显活性的rhEGF,为EGF的进一步研究与应用打下了基础。     

重组人白细胞介素6部分生化物理学性质的鉴定

采用工程菌 E.coli DH5 α(p IB- h IL- 6 ) ,经过发酵培养、表达和包含体的分离纯化等步骤 ,获得了 N端缺失 5个氨基酸的 rh IL- 6纯品。对其理化生物学性质进行分析。结果表明 ,纯品 N-端氨基酸序列为 MEDSKD… ;在 2 76 nm波长处有一个特异的蛋白吸收峰 ;分子量为 2 1 487.2 ;裂解的肽段分布在理论值的肽段分布范围之内 ;p I为 6 .1 ;能与兔抗人 IL- 6抗体特异性结合 ;比活性达2 .0 5× 1 0 8IU/mg。