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鸡贫血病毒全基因组点突变体的体外构建及其在宿主细胞MSB1的转染研究 总被引:1,自引:0,他引:1
在已构建鸡贫血病毒(CAV)全基因组体外克隆(pCAV2.4)的基础上,设计一对特定引物,用CPR定向点突变方法扩增出含有完整的EcoRI位点的CAV全基因组(2.3kb),并克隆入pUC18载体中,获得阳性克隆,命名为pCAVE^ 。经酶切鉴定和序列分析EcoRI位点两侧序列,原先不完整的EcoRI位点(-GACTTC-)已被定向点突变为完整的EcoRI位点(-GAATTC-)。对重组质粒pCAVE^ 以EcoRI酶切回收CAV全基因组DNA,在体外连接并经纯化后,经Effectene转染易感宿主细胞MSB1。将转染细胞培养上清连续传代8次以后,出现病毒复制(MSB1细胞培养基颜色不再变黄)。取此时细胞培养液感染无CAV的1日SPF小鸡,14天出现典型的鸡盆血症状和胸腺萎缩、骨髓脂肪变性等病变。获得了能在体外自主复制并组装成完整CAV病毒子的感染性核酸。 相似文献
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