增强p53、p21及抑制c-myc表达对MCF-7细胞增殖的协同抑制作用

为了探讨增强p53、p21基因表达水平和降低c-myc基因表达水平对乳腺癌细胞MCF-7增殖的协同抑制作用,以及这些基因对细胞产生效应时的相互关系,本研究中首先构建了正义的p53、p21和反义的c-myc3种真核细胞表达载体,并根据析因实验设计三种载体不同剂量组合。按照组合用质粒转染细胞,然后对转染细胞的增殖抑制率进行检测,并采用金正均Q值法、单因素方差分析中的LSD法、聚类分析法等统计学方法对结果进行统计分析。结果显示,不同量的p53、p21反义c-myc对MCF-7细胞的增殖均有抑制作用,抑制的程度各基因间存在差异。在各基因组合中,p21与反义c-myc,p53与反义c-myc联用具有协同作用,对MCF-7细胞的增殖产生更强的抑制,而p53与p21之间未显示出协同作用。对三基因协同结果进行聚类分析后,发现第一类组合协同作用最明显,第九类组合的抑制率最高。由此推测,作为抑癌基因的p53或CDK抑制基因p21高表达,同时原癌基因c-myc表达受到抑制,可相互协同显著增强对MCF-7细胞增殖的抑制作用。     

弹性成像定量分析对自身免疫性肝病的诊断价值

目的:自身免疫性肝病的发病机理至今尚未明确,与多种疾病之间存在着联系,临床诊断具有一定的难度。本研究利用超声弹性成像技术定量分析自身免疫性肝病的病理特征,探讨该技术的诊断价值,为自身免疫性疾病的治疗提供诊断依据。方法:选取我院2011年3月-2013年6月收治的自身免疫性肝病患者182例,随机分为观察组和对照组。观察组98例患者采用弹性成像定量分析的方法进行诊断,对照组84例则采用常规病理学诊断。观察并比较两组患者的诊断准确率及诊断耗时。结果:观察组检出94例,诊断率为95.92%;对照组检出81例,诊断率为96.43%,两组诊断准确率比较无明显差异(P0.05)。观察组平均诊断耗时为5.6 h;对照组平均诊断耗时为11.6 h,观察组诊断时间比对照组短,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:弹性成像定量分析对自身免疫性肝病的诊断准确率与病理活检诊断具有较好的一致性,且诊断耗时短、患者依从性好,值得在临床中进一步推广应用以辅助病理诊断,避免误诊或漏诊现象发生。     

超声弹性成像评价肝纤维化程度的探讨

目的:运用实时组织弹性成像(RTE)对肝脏弹性图像进行评分,并通过与实验室指标的比较,探讨RTE评分诊断肝纤维化程度的可行性与准确性。方法:选取我院收治的慢性病毒性肝炎患者90例作为研究对象,行RTE以及肝功能、血常规和凝血五项等实验室检查,随后肝活检获得病理学证据。比较RTE评分与实验室指标诊断肝纤维化程度的准确性。结果:90例患者中,S0期21例,S1期31例,S2期31例,S3期20例,S4期7例。RTE评分与肝纤维化程度呈正相关(r=0.79,P<0.05)。同样,门冬氨酸氨基转移酶/血小板比例指数(APRI)与肝纤维化程度也呈正相关(r=0.57,P<0.05)。RTE评分只与APRI呈相关性(r=0.667,P=0.000)。RTE评分诊断明显肝纤维化的敏感度为94.31%、特异度为78.65%、准确率为85.22%、阳性预测值为76.63%、阴性预测值为94.58%,均高于APRI。结论:实时组织弹性成像技术在诊断肝纤维化方面有广泛的临床研究价值和前景。     

失巢凋亡及其在肿瘤侵袭、转移中的调控

作为肿瘤转移的屏障, 细胞与邻近细胞或者细胞外基质(Extracellular matrix, ECM)失去联系后将遭受凋亡, 这种细胞死亡方式称为“失巢凋亡”。正常上皮细胞或不具备转移性质的实体瘤细胞从原位脱落进入血液循环后就会引发失巢凋亡, 失巢凋亡的意义在于防止这些脱落的细胞种植并生长于其他不适宜的地方。而肿瘤细胞, 尤其是一些容易发生远距离转移的恶性肿瘤细胞, 具有极强的抗失巢凋亡特性, 便于转移侵袭。研究发现肿瘤细胞能通过多种方式抵抗失巢凋亡, 比如细胞自分泌生长因子或者由邻近细胞旁分泌, 激活促存活信号通路; 细胞改变整合蛋白的表达模式, 使之能够接收新环境的生存信号; 活性氧(Reactive oxygen species, ROS)通过不依赖配体的方式激活生长因子受体, 从而逃逸凋亡; 上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition, EMT)激活等。这些方式导致细胞存活信号激活和凋亡途径抑制, 最终使肿瘤细胞抗失巢凋亡, 促进转移。文章综述了当前研究的肿瘤转移的关键机制, 这些策略也将成为肿瘤治疗的重要靶点。     

拟南芥AtUNE12基因的耐盐功能初探

bHLH转录因子家族成员在植物生长发育、生理代谢及非生物胁迫响应过程中起重要作用。本研究选取拟南芥抗逆相关bHLH转录因子家族中AtUNE12基因为研究对象,对其进行耐盐功能初探。首先构建AtUNE12基因的植物过表达载体（pROKⅡ-AtUNE12）,通过农杆菌介导的浸花法转化拟南芥,利用qRT-PCR技术检测获得T₃代AtUNE12过表达转基因植株。在盐胁迫下,分析过表达AtUNE12与野生型拟南芥长势、根长及鲜重;比较过表达AtUNE12与野生型植株的电解质渗透率、失水率、MDA含量、POD与SOD活性及H₂O₂含量,鉴定AtUNE12基因是否具有耐盐能力。结果表明：过表达AtUNE12基因降低了拟南芥植株的失水率、电解质渗透率及MDA含量,保护细胞膜结构的完整性;增强了POD与SOD活性,降低了拟南芥植株内的H₂O₂含量,进而增强拟南芥植株的ROS清除能力,从而提高拟南芥的耐盐能力。     

亚太发展中国家三大城市景观格局梯度动态与城乡融合区特征

以亚太地区3个大城市中国上海、菲律宾大马尼拉和越南河内为对象,在3S（GIS,GPS,RS）技术支持下,选取了近20年的遥感资料,采用基于斑块密度等6种景观指数的景观格局梯度分析的手段,研究了这3座城市城市化的景观格局动态及与之相关的城乡融合区特征。结果表明：在城市化过程中,这3座城市城市化区域景观格局都有显著变化,斑块密度升高,破碎化加强;在样带上,斑块密度、Shannon多样性等指数与到市中心的绝对距离有较强的相关性,景观指数能检测出城市化的梯度和城市化的推进方向;3座城市的城乡融合区有着不同的发展特征,城市化呈现出不同的发展阶段特点。大马尼拉市城市化阶段最高,郊区城市化也最早,城乡融合区明显,上海市城市化阶段较高,郊区城市化和城乡融合区也较为明显,而河内的城市化阶段较低,郊区城市化和城乡融合区不明显。需要对城市融合区的生态环境加以保护。     

增强p53、p21及抑制c—myc表达对MCF-7细胞增殖的协同抑制作用

为了探讨增强p53、p21基因表达水平和降低c—myc基因表达水平对乳腺癌细胞MCF-7．增殖的协同抑制作用,以及这些基因对细胞产生效应时的相互关系,本研究中首先构建了正义的p53、p21和反义的c—myc 3种真核细胞表达载体,并根据析因实验设计三种载体不同剂量组合。按照组合用质粒转染细胞,然后对转染细胞的增殖抑制率进行检测,并采用金正均Q值法、单因素方差分析中的LSD法、聚类分析法等统计学方法对结果进行统计分析。结果显示,不同量的p53、p21反义c—myc对MCF-7细胞的增殖均有抑制作用,抑制的程度各基因间存在差异。在各基因组合中,p21与反义c—myc,p53与反义c—myc联用具有协同作用,对MCF-7细胞的增殖产生更强的抑制,而p53与p21之间未显示出协同作用。对三基因协同结果进行聚类分析后,发现第一类组合协同作用最明显,第九类组合的抑制率最高。由此推测,作为抑癌基因的p53或CDK抑制基因p21高表达,同时原癌基因c—myc表达受到抑制,可相互协同显著增强对MCF-7细胞增殖的抑制作用。     

非肝炎病毒所致肝损害超声影像与病理关系的探讨

目的:对154例肝损害原因的超声与病理关系进行总结性分析,以提高对肝损伤的认知.方法:所有病例均行肝脏穿刺及病理检查,并结合临床相关特异性检查,明确肝损害的原因.结果:超声提示分别为肝损害、脂肪肝、肝纤维化、肝硬化,部分超声显示未见异常,病理结果提示在超声检查未见明显异常者中,部分确诊为代谢性疾病,超声提示肝损害组中,病理提示因药物、环境类生化因素所致肝损伤占有相当比例.结论:超声检查在肝损害的筛查中作用明显,而在肝损害原因中,药物性及环境类生化因素所致的肝损害占有相当比例.     

衰老或肿瘤：癌基因诱导的双向性

在大部分的肿瘤中都发现有癌基因的活化,癌基因的活化被认为是导致肿瘤发生的重要原因．然而,在野生型细胞内,癌基因的活化可以诱导细胞衰老,称为癌基因诱导的细胞衰老(oncogene-induced senescence, OIS),从而抑制进一步的肿瘤发生．因而,癌基因的活化具有诱导衰老或肿瘤的双向性．DNA损伤调控反应(DNA damage checkpoint response, DDR)是细胞应对DNA损伤时感应损伤,从而延迟或阻滞细胞周期进程的一种分子信号传递通路,是诱导细胞衰老的重要机制．癌基因的活化可以引发DNA损伤信号的产生,从而激活DDR,诱导细胞衰老．在DDR异常时,癌基因的激活可引发DNA的过度复制与细胞的过度增殖,并导致基因组不稳定性的积累,最终导致肿瘤发生．DDR的完整性决定了癌基因诱导的双向性．DDR在癌基因诱导中的重要作用,提示了保持和恢复DDR的完整性可以作为肿瘤预防和治疗的新方向．     

弗氏链霉菌丝氨酸蛋白酶基因的克隆及表达

从一株具有极强的降解羽毛能力的弗氏链霉菌菌株（Streptomyces fradiae var.k11）中纯化得到了一种丝氨酸蛋白酶SFP2。经蛋白测序,得到部分氨基酸序列,设计简并引物,PCR扩增得到部分基因序列,通过构建基因文库,获得了包括信号肽序列在内的完整的基因sfp2(EMBL收录号AJ784940),开放阅读框全长924bp,包括114bp的信号肽编码序列和810bp的酶原编码序列, 其中成熟蛋白编码基因长576bp,编码191个氨基酸,理论分子量为19.112kD。酶原编码基因和成熟蛋白编码基因均在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中得到了表达,酶原编码基因表达产物具有正常的生物学活性,证明了克隆基因的生物学功能。