单域抗体与抗感染免疫

随着分子生物学技术的发展及抗体研究的不断深入,单域抗体(single domain antibodie,sdAb)的研究已成为肿瘤靶向治疗研究领域的热点之一。作为实验研究和治疗应用的重要工具与制剂,单域抗体在调节免疫功能,中和毒素和抗微生物感染等方面具有广阔的应用前景。     

新疆家蚕抗菌肽体外抑制人胃癌细胞AGS的增殖

新疆家蚕抗菌肽(Cecropin XJ)具有抑制肿瘤细胞生长的能力。为研究不同浓度Cecropin XJ体外对人胃癌细胞AGS生长的影响,分别采用MTT比色法、软琼脂集落形成实验、流式细胞术、划痕愈合和Transwell实验进行检测。结果表明,20~100μg/mL的Cecropin XJ能够显著抑制AGS细胞的增殖,并具有剂量和时间依赖性。同时,20,50,100μg/mL的Cecropin XJ处理后集落形成率分别降低了(35.81±13.10)%、(48.12±5.68)%和(81.46±6.21)%。AGS细胞经不同浓度Cecropin XJ处理24 h后,凋亡率逐渐上升并且细胞周期阻滞于S期。20μg/mL Cecropin XJ能够显著抑制AGS细胞的迁移和侵袭,100μg/mL Cecropin XJ几乎完全抑制AGS细胞的迁移和侵袭。以上结果说明,Cecropin XJ能够抑制AGS细胞生长、增殖,有可能成为人胃癌治疗的辅助药物。     

人LRG1基因的原核表达及生物信息学分析

为了探讨LRG1基因结构与功能,对该基因进行克隆并构建到原核表达载体上,并对其进行表达及生物信息学分析。用Trizol法提取人肝癌HepG2细胞总RNA后,PCR扩增得到LRG1片段,经鉴定后将目的基因与原核表达载体pET28a连接,经诱导表达获得His-LRG1蛋白。LRG1基因cDNA片段大小为1 044 bp,编码347个氨基酸;成功构建pET28a原核表达载体,经多次不同条件诱导后,得到大小约40 kD目的蛋白;利用软件对LRG1蛋白的一级、二级结构进行了预测,分析总结得LRG1基因编码的蛋白是一个不稳定且具有亲水性的蛋白,可与多种信号开关相互作用。LRG1属于高度保守的富亮氨酸重复家族成员,其原核表达载体不易诱导产生大量目的蛋白,克隆表达该基因有利于验证其结构与功能关系。     

GPC3基因的结构与功能生物信息学预测

磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(Glypican 3,GPC3)作为原发性肝癌标志物,对其结构与功能进行生物信息学分析。借助生物信息学相关软件,对该基因所编码的氨基酸理化性质、信号肽、跨膜结构、蛋白质的二级结构,蛋白质翻译后修饰、蛋白三级结构及亚细胞定位及B细胞线性表位、蛋白质相互作用网络进行生物信息学分析。GPC3蛋白为稳定的亲水性蛋白,具有信号肽,主要定位于细胞质膜。二级结构元件只要以α螺旋,β折叠为主。有18个Ser、7个Thr、23个Tyr可成为蛋白激酶磷酸化位点。GPC3蛋白与Wnt信号家族蛋白具有相互作用。分析预测GPC3,为探究其参与原发性肝癌方面有重要意义。     

抗菌肽抗肿瘤作用的研究进展

抗菌肽是生物体抵御外界病原体侵袭时产生的一类保守的小分子多肽,是生物体内先天免疫防御机制的重要组分。抗菌肽可以选择性杀伤肿瘤细胞,而对正常细胞损害较小,已作为化、放疗药物潜在的替代品被广泛研究和开发。从抗菌肽对不同肿瘤细胞选择性作用机制、抗菌肽药物设计的发展及应用前景等方面进行综述。     

FASN基因的原核表达及生物信息学分析

脂肪酸合成酶(FASN)在生物体内起着重要的作用,主要参与恶性肿瘤的数量调控。本研究旨在构建pET28a-FASN原核表达载体,并表达重组His-FASN蛋白,对该基因进行结构与功能的生物信息学分析。设计FASN基因特异性引物,通过PCR扩增获得的目的基因与原核表达载体pET28a连接,经IPTG诱导表达His-FASN蛋白。获得基因片段大小为1 320 bp,编码440个氨基酸;成功构建至pET28a原核表达载体,通过优化表达,确定在温度为35℃、IPTG浓度0.5 mmol/L、诱导时间为6 h的条件下融合蛋白表达量较高,获得蛋白大小约为53 kD;生物信息学分析结果表明FASN基因编码的蛋白是一个不稳定且具有亲水性的蛋白,不存在信号肽及跨膜区,可成为蛋白激酶磷酸化位点有12个Ser、5个Thr、3个Tyr。此外,从蛋白相互作用网络中发现,相互作用的蛋白包括主要酰基辅酶A合成酶长链家族成员及乙酰辅酶A羧化酶家族成员,为开发抑制剂药物提供了理论依据。