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人体TK-C基因片段和TK cDNA片段并发转化细胞的稳定性研究 总被引:1,自引:1,他引:1
本文报道了人体细胞质胸腺嘧啶核苷激酶(TK-C;EC2.7.1.21)基因的一个片段同TKcDNA的一个片段,一起转化小鼠TK缺陷型细胞株Ltk~-细胞时,这两个单独都不能表达TK活性的DNA片段可能通过同源重组,重新构建成一个能够表达TK的完整的功能单位。分析了TK~+并发转化细胞表达TK的稳定性,并用Southern印迹法杂交证实这两个外源DNA片段已重组成一个片段而整合在受体细胞基因组里,因而并发转化细胞全是稳定型。讨论了两个功能上可以互补的外源DNA片段,在受体细胞里重组成一个能表达基因活性的功能单位的可能机制。 相似文献
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一、哺乳类细胞总RNA的提取 1.从培养细胞中提取 (1)准备10瓶(底面积为4.5×8.5cm~2)长得半满的培养细胞(约10~7个细胞)。 (2)吸去瓶中培养液,各加入5ml新鲜培养液,37℃培养4小时左右。 (3)吸去培养液,各加入5ml预冷的1×PBS溶液 相似文献
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一、印迹法转移核酸 1.瑟慎印迹转移(Southern Blot) (1)按实验要求用某一限制性内切酶消化DNA样品。一般情况下,每微克DNA用3—10单位酶(质粒,噬菌体DNA等每微克3个单位酶,哺乳类DNA每微克8—10单位),37℃下保温5小时或过夜即可完全消化。 相似文献
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