6A型肺炎球菌结合物分子大小对小鼠免疫原性的影响

目的 比较不同分子大小的6A型肺炎球菌(serotype 6A Streptococcus Pneumoniae )结合物和佐剂吸附在小鼠体内免疫原性的影响。方法 通过乙酸水解降低6A型荚膜多糖的相对分子质量制备成水解物,水解物经1-氰基-4-二甲胺基吡啶四氟硼酸盐(CDAP)活化并与破伤风类毒素己二酸酰肼衍生物TT AH 结合,制备成结合物。用Sepharose 4 Fast Flow 纯化结合物,并根据化学检测结果将结合物分为 K D 0.0~0.2、 K D 0.2~0.4、 K D 0.4~0.6等3个组分,每个组分分别以磷酸铝佐剂吸附,将吸附前后的各个组分按照每针次每只小鼠0.2 μg分别免疫小鼠,并采用ELISA检测结合物在小鼠体内的抗体水平。结果 3种不同相对分子质量吸附前后的结合物在小鼠体内均能产生较高水平的抗体,各组2、3针之间具有明显的加强效应。在吸附组和未吸附组中,3种不同分子大小的结合物在小鼠体内产生抗体水平无明显差异。各组分佐剂吸附后的结合物血清抗体滴度高于未吸附组,但这种差异无统计学意义( P > 0.05)。结论 结合物的分子大小对小鼠体内抗体水平的产生没有明显影响;磷酸铝佐剂吸附对于不同分子大小的结合物在小鼠体内的免疫原性有一定的增强效应,但这种增强效应差异无统计学意义。     

4型肺炎球菌多糖丙酮酸含量核磁共振测定方法的建立及验证

目的 建立检测4型肺炎球菌多糖侧链上的丙酮酸(pyruvic acid, PA)含量的定量核磁共振(quantitativenuclear magnetic resonance, qNMR)方法,并进行验证。方法 用以3-(三甲基硅)丙酸-D4钠盐为内标的重水作为溶剂,在600 MHz核磁共振仪上采集波谱,采集参数为：脉冲程序zg30,弛豫延迟时间9 s,扫描次数512次。对方法进行线性、范围、专属性、准确度、精密度、耐用性验证。结果 PA含量在0.10～12.00 mg/mL范围内线性良好,且R²> 0.99。以PA上的甲基质子峰(化学位移1.54 ppm)为特征峰测定PA信号峰,qNMR检测方法专属性良好。两种方法的回收率分别在93.52%～101.37%和92.71%～100.10%之间;建立的方法重复性及中间精密度良好,不同PA含量测定值RSD分别为3.67%,2.12%和3.70%;改变温度和扫描次数,2种条件的测定结果差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 建立的4型肺炎球菌多糖中PA含量qNMR检测方法简便、切实有效,为13价肺炎球菌结...     

NIH小鼠模型在评价13价肺炎球菌结合疫苗免疫原性中的作用

目的 研究小鼠模型在评价13价肺炎球菌结合疫苗(pneumococcal conjugate vaccine, PCV)免疫原性中的作用。方法 15批13价PCV免疫NIH小鼠,免疫3针后采血,检测血清抗不同血清型荚膜多糖IgG抗体的含量和调理吞噬杀菌抗体的水平。检测方法采用WHO推荐的ELISA和OPA。系统性比较IgG抗体含量和调理吞噬杀菌滴度之间的相关关系,包括组内相关关系和均值相关关系以及两者之间在统计学上的差异。结果 (1)各型的组内相关性在每个组之间有所不同23F型OPA滴度与IgG抗体水平之间相关系数比较低,而且各组之间的差异均有统计学意义(P均<0.05);3型的相关系数比较高,而且与大部分血清型(如4、6A、6B、9V、14、18C、19F和23F型)之间的差异均有统计学意义(P均<0.05);而7F型和几乎所有的型(23F型除外)之间差异均无统计学意义(P均>0.05)。另外,方差分析结果表明,各型之间总体的差异有统计学意义(P<0.05)。(2)每组有13个血清型,其在各组之间的差异除了G7组与其他12组的差异有统计学意义之外,其他各组之间...     

无动物源成分伤寒沙门菌Ty2株种子批传代稳定性研究

目的 检定无动物源成分伤寒沙门菌Ty2株主代种子及工作种子,验证工作种子连续传代30代次的传代稳定性,为伤寒Vi多糖蛋白结合疫苗无动物源工艺的建立提供前期研究数据。方法 无动物源成分伤寒主代种子、工作种子及脱脂牛奶工作种子分别连续传代至第30代次,在《中华人民共和国药典》2020版(三部)(简称《中国药典》)伤寒沙门菌检定要求的基础上,进一步应用16S rRNA基因序列分析、多位点序列分型(multilocus sequence type, MLST),并以伤寒主要抗原表位Vi抗原片段中毒力基因viaB区域为参考基因组,比对连续传代伤寒工作种子基因序列的遗传稳定性。结果 无动物源成分伤寒主代种子、工作种子及脱脂牛奶工作种子分别连续传代至第30代次种子,表型鉴定结果均符合《中国药典》伤寒沙门菌检定要求;连续传代至第30代次,Vi抗原血清凝集效价、O抗原血清凝集效价均未发生明显变化;16S rRNA基因序列鉴定PCR产物大小在1 474～1 478 bp之间,与NCBI数据库比对鉴定均为肠沙门菌肠亚种伤寒血清型;MLST分型结果表明,疫苗用伤寒沙门菌Ty2株为ST1型,连续传代30代次ML...     

肺炎球菌多糖衍生物中1,4-丁二胺残留量核磁共振检测方法的建立及验证

目的 建立核磁共振(nuclear magnetic resonance, NMR)法检测肺炎球菌多糖衍生物中1,4-丁二胺残留量的方法,并对方法进行验证。方法 建立氢谱(¹H-NMR)检测方法：脉冲程序为zg30,温度为298 K(24.85℃),图谱宽度为7 211 Hz,扫描次数为512次,中心频率为4.70 ppm,弛豫延迟时间为9 s;对该方法进行线性、专属性、准确度、精密度、耐用性验证,并确定该方法的定量限。结果 以1,4-丁二胺中H-1和H-4位质子峰为特征峰,该方法检测1,4-丁二胺专属性较好。在0.05～5.00 mg/mL范围内,1,4-丁二胺质量浓度与其对应的峰面积呈良好的线性关系,相关系数R²=0.999。1,4-丁二胺添加实验回收率在92.73%～99.51%之间;建立的方法重复性及中间精密度均良好,不同质量浓度1,4-丁二胺测定值RSD均小于5%;该方法的定量限为0.01 mg/mL;改变温度和扫描次数后1,4-丁二胺的检测结果差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 建立的¹H-NMR...     

被忽视和未被充分利用植物物种:中国首批推荐名单

由于工业的发展、城市的拓展造成土地资源紧缺,人们过分追求高产,长期忽略了一些多样化的具有潜在利用价值并有利于可持续发展的作物。这些被忽视和未被充分利用的植物物种能够为人类提供多元化的食物来源,在保证全球食品安全的同时也有利于保护人类的生存环境。这些被忽视和未被充分利用的植物物种主要存在并保存于发展中国家,中国也存在很多这样的物种。虽然这些作物种类依然保留在当地的社会文化和生产实践中,但它们的优势没有充分展现,也未得到很好的研究和保护。通过详尽调查研究和分析,我们提出了中国应优先利用的被忽视和未被充分利用植物物种名单。这个名单包括9类植物,5种果树、3种粮食作物、1种蔬菜作物,大部分具有药用价值,其中有7类起源于中国,2种由国外引进,它们对中国的生态和经济有重大作用。充分发挥和利用这些物种的作用,将能够为中国现代化农业的可持续发展、应对全球气候变化做出贡献。