病毒基因组启动子识别的人工神经网络方法

本文运用神经网络方法,并结合病毒基因分子生物学有关理论与统计事实,对病毒基因启动子区域进行了识别,文中选择了共35个基因组,作为研究对象．学习组选择了28个基因组,预测组选择了7个基因组,结果表明,将神经网络模型与病毒基因有关理论相结合,能够运用计算方法,以大量的可能启动子组合中排列出唯一的启动子区域．     

人白细胞介素－3在大肠杆菌中的高效表达

人白细胞介素－３（ｈｕｍａｎＩｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ３,ｈＩＬ－３）是一种造血前体细胞早期分化的关键调节因子。用ＰＣＲ方法从人Ｔ淋巴细胞ｃＤＮＡ文库中扩增出０．４４ｋｂ的ＤＮＡ片段,并克隆入ｐＵＣ１９载体中。经ＤＮＡ序列测定,确定０．４４ｋｂ的ＰＣＲ产物合完整的编码人白细胞介素－３成熟蛋白ｃＤＮＡ序列,并在信号肽与成熟蛋白编码序列之间通过突变引入了限制性内切酶位点和ＡＴＧ起始密码。构建的ＰＬ启动子控制下的ｈＩＬ－３ｃＤＮＡ表达质粒,转入大肠杆菌Ｔａｐ１０６,经４２℃热诱导,获得ｈＩＬ－３的表达产物。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳显示表达产物为１５ｋｄ,约占细菌总蛋白的１５％。表达产物经ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ验证。ｈＩＬ－３表达产物在细胞内形成包涵体,纯化包涵体,使产物纯度提高到７０．８％,产物复性后,能明显促进ｈＩＬ－３依赖细胞株生长,具有明显的生物活性。产物转移到ＰＶＤＦ膜后进行Ｎ端序列分析,Ｎ端１６个氨基酸正确。     

云南几种主要植被类型土壤中木霉的生态分布

调查了云南省４种植被下土壤真菌总数、木霉数量及种类分布特点．森林土壤中木霉相对数量约占土壤真菌总数的３～１５％,并随不同样地、采样季节及土层而异,优势种类因不同林型土壤而异．钩状木霉分布广泛,尤其在热带雨林的土壤生境中占优势．哈茨木霉和黄绿木霉则分别在季风和半湿润常绿阔叶林土壤中出现频率较高．     

流行性乙型脑炎病毒E蛋白主要抗原域的原核表达与间接ELISA检测方法的初步建立

重组质粒pET-E转化宿主菌BL21,经1.0mmol/LIPTG诱导,外源基因以包含体的形式获得高效表达.通过Western blotting检测证明表达产物具有良好的抗原性.以纯化后表达产物作为诊断抗原包被酶标板建立了检测JEV抗体的间接ELISA方法.结果表明,抗原的最佳稀释度为12000,血清的最佳稀释度为1200,待检血清阳性标准初步定为OD490nm＞1.2,且待检血清与阴性血清的OD490m比值大于2.     

神经节苷脂联合α-硫辛酸治疗糖尿病神经源性膀胱临床观察

目的:观察α-硫辛酸、神经节苷脂联合治疗糖尿病神经源性膀胱的临床疗效。方法:60例2型糖尿病神经源性膀胱患者,随机分为α-硫辛酸治疗对照组、神经节苷脂治疗对照组,联合治疗组,疗程30d,观察症状体征及治疗前后B超膀胱残余尿量症状的变化,比较不同方案的疗效。结果:α-硫辛酸治疗对照组有效率90%,神经节苷脂治疗对照组有效率90%,联合治疗组有效率95%两组间无统计学差异(P>0.05),但3组的治愈率分别为90.0%、50.0%、60.0%,治疗组的治愈率高于两个对照组,有统计学差异(P<0.05)。结论:α-硫辛酸和神经节苷脂联合治疗糖尿病神经源性膀胱有较好的临床疗效,值得临床推广。     

猪繁殖与呼吸综合症病毒GP5蛋白原核表达初步研究

猪繁殖与呼吸综合症是由猪繁殖与呼吸综合症病毒(Porcine reprodutive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引发的病毒性传染病,病症主要表现为怀孕母猪早产、流产、木乃伊胎以及仔猪呼吸症状和高死亡率[1,2].该病于1987年首先在美国爆发[3],1990年德国亦发现此病,并迅速传播到欧洲其他国家.我国在1996年报道有该病流行[4],由于该病的迅速蔓延使整个世界养猪业遭受了巨大的经济损失.     

禽流感病毒H5N1亚型HA基因表达及其产物的应用

根据GenBank公布的禽流感病毒H5N1亚型血凝素基因 (HA) (GenBank DQ023145) 序列设计一对引物P1、P2,以重组质粒pUC-HA为模板扩增去除信号肽的HA成熟蛋白. PCR 产物克隆入pMD18-T载体,经测序发现在967位A突变为T,形成一个终止密码子TAA. 在突变位点附近设计两条有21个碱基配对的突变引物P3、P4,采用重叠延伸剪切法 (SOE) 用A定点替换T碱基,然后将正确的基因片段定向插入到表达载体pET-32a (+) 中,诱导表达获得正确的表达产物.Western-blot分析表明,表达的重组蛋白能与经BL21(DE3)大肠杆菌菌体裂解液处理的H5亚型禽流感病毒阳性抗血清发生特异性反应.利用纯化的重组HA蛋白初步建立了检测H5亚型禽流感病毒抗体的间接ELISA方法,该方法可以代替传统的血凝与血凝抑制方法用于区分禽流感病毒的血清亚型.本研究为禽流感病毒亚单位疫苗及新型诊断试剂盒的研究奠定了基础.     

脂肪酶产生菌的筛选及鉴定研究

为寻找合适的产脂肪酶野生菌,以期能高效的催化合成生物柴油。通过添加橄榄油作为惟一碳源进行富集培养,然后以透明圈平板筛选法从油污土壤样品中成功地筛选到了一株酶活力值为10.12U/ml产脂肪酶菌株。通过对该菌株表型、生理生化特征分析及16S rRNA部分序列的系统进化发育分析鉴定该菌为芽胞杆菌属,定名为BacilluspumilusB2。     

塔里木河流域下游植物区系及生态学研究

塔里木河流域下游地区植物有30科80属122种。以双子叶植物类群占优势,其中多年生草本植物在塔里木河流域下游植物中占多数。显示了物种形成是年轻的进化类型。生态类型以旱生植物为主。占总种数的52％,这足长期适应比较干旱的自然环境的结果。该区系的温带成分占优势。地中海成分也占有一定地位。这些区系成分的植物都是干旱区荒漠植物的代表。区系地理反映了物种演化过程的历史气候、地质变化动态。查清塔里木河流域下游植物资源的数量和分布区的变迁,为该地区的植物资源保护提供科学依据。     

猪α1-干扰素的基因改造与高效原核表达

poIFNα1基因中含有大量的大肠杆菌稀有密码子,为了获得高表达,使用了大肠杆菌的偏爱密码子,人工合成了poIFN|α1成熟蛋白编码基因。在保留编码蛋白序列的同时,使其5′端A+T的含量增加到最大限度,并将其终止密码子改为TAA。将合成的poIFNα1成熟蛋白编码基因插入原核单纯表达载体pRLC中,转化大肠杆菌DH5α。实现了poIFNα1在大肠杆菌中的高效表达,表达产物以包涵体形式存在。纯化的包涵体经含DTT的6 mol/L盐酸胍的变性液溶解及含GSHGSSG的复性液复性处理,复性后的表达产物浓缩后经凝胶层析纯化,细胞病变抑制法测定表明,重组poIFNα1具有较高的抗病毒活性,约为6.4x10⁶u/mg。 