耐高温耐酸稳定假密环菌(Armillariella tabescens) MAN47β-甘露聚糖酶体外分子定向进化

从已经建立的易错PCR初级突变文库中筛选得到的16个兼具耐酸、高温稳定、高酶活力的克隆出发,将其作为DNA shuffling的亲本基因,利用DNA shuffling技术,结合易化筛选和96微孔板通量筛选的方法获得耐酸、高温稳定的克隆。并且,对筛选出来的耐酸高温稳定的突变子进行测序分析和同源建模,比较分析β-甘露聚糖酶突变基因序列的生物学信息。经过两轮DNAshuffling,最终筛选得到一个耐酸高温稳定突变体1108,其在90℃时酶活力还能维持在70%;在pH 3.0时酶活力维持在70%;在高温80℃和pH 4.0的条件下,酶活力是野生型的10倍;常规条件下(pH 6.0,40℃),酶活力是野生型酶的5倍。序列比对发现耐酸、高温稳定突变体1108有三个碱基发生了改变(T289A、A535T、T1085C),导致相应的氨基酸发生了改变(Ser97Thr、Val362Ala、Ile179Leu)。根据同源建模结果和氨基酸性质研究发现,突变位点位于催化中心附近,推测第97位的突变与酶的耐酸性和活性有关,第179位和第362位的突变与酶的高温稳定性有关。实验结果为进一步了解β-甘露聚糖酶MAN47的结构与功能之间的关系提供有用参考。     

宫颈上皮内瘤变患者阴道微生态状况与 LEEP术后预后关系

目的研究宫颈上皮内瘤变(CIN)患者阴道微生态状况及LEEP术后阴道微生态状况的变化特点,分析阴道微生态状况与CIN患者预后的关系。方法回顾性分析2016年1月至2018年1月温州医科大学定理临床学院122例高危型人乳头瘤病毒(hr-HPV)阳性的CIN患者LEEP术治疗前后阴道微生态的变化特点。结果 LEEP术后菌群密集度Ⅱ～Ⅲ级(74.59%)、多样性Ⅱ～Ⅲ级(68.03%)、乳酸分级Ⅰ～Ⅱa级(70.49%)出现增多,需氧菌性阴道病(AV)(9.84%)、细菌性阴道病(BV)(14.75%)、外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)(12.30%)以及滴虫性阴道炎(2.46%)的检出率降低,pH值(4.2±0.5)降低,与术前比较差异具有统计学意义(均P0.05);术后复诊hr-HPV阳性CIN患者菌群密集度Ⅱ～Ⅲ级(35.00%)、多样性Ⅱ～Ⅲ级(40.00%)、乳酸分级Ⅰ～Ⅱa级(25.00%)低于hr-HPV阴性CIN患者,AV(30.00%)、BV(35.00%)、VVC(30.00%)检出率和pH值(4.9±0.4)高于hr-HPV阴性CIN患者,差异有统计学意义(均P0.05)。结论阴道微生态失衡可降低宫颈免疫力,促进CIN进展、癌变,改善阴道微生态可抑制hr-HPV的感染,抑制宫颈细胞的异常增生、癌变。