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凝胶成像系统对核酸扩增产物的定量检测 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 建立一种PCR-凝胶成像系统定量分析核酸扩增产物的方法.方法:1.用PCR荧光定量分析仪实时监测PCR扩增曲线,并选择合适的扩增循环次数,2.将梯度标准血清(10^1~10^6拷贝/u1)分别进行40,35及32次循环次数的扩增,在琼脂糖电泳,EB染色后,进行凝胶分析;3.选择凝胶分析软件中能客观反映核酸实际含量的最适参数,制定标准曲线。结果:40及35次循环时,在10^1~10^4拷贝/ul,线性良好,而在10^4,10^5及10^6拷贝/ul三个梯度时直线上升缓慢,趋于平坦;32次循环时,10拷贝/ul未能检出,10^2~10^6拷贝/ul的5个梯度的模板(对数值)与产物(体积)有良好的线性关系(r=0.97)。结论:32次循环线性范围较广,为最适循环次数;在UVIband的光密度定量分析指标中,以体积或体积百分比作为定量指标较好;本法除可用于常规PCR产物定量(HBV-DNA,TB—DNA),也适用于RT-PCR(HCV-RNA)。 相似文献
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