靶向PSMA多价纳米抗体的制备及其生物学活性表征*

目的:构建原核表达系统,制备靶向前列腺特异性膜抗原(prostate-specific membrane antigen,PSMA)多价纳米抗体并初步评价其生物学活性。方法:Bglbrick法构建多价纳米抗体表达载体,转化至大肠杆菌表达并利用亲和层析法纯化。联合蛋白质电泳和Western blot验证纯化产物,BCA法检测表达量。通过免疫荧光和流式细胞术定性评估PSMA特异性亲和能力,细胞ELISA法定量检测PSMA亲和水平,流式细胞术检测内吞效率。结果:成功构建靶向PSMA单价、二价、三价和四价纳米抗体大肠杆菌表达菌株。发酵结果表明四种纳米抗体均能在摇瓶水平实现高效可溶表达,其中二价纳米抗体表达量最高[(259.14±23.56) mg/L],单价纳米抗体表达量最低[(100.58±6.27) mg/L]。亲和实验结果证实四种纳米抗体均能特异性识别并结合PSMA阳性肿瘤细胞,与单价纳米抗体相比,二价、三价和四价纳米抗体对PSMA亲和能力分别提高了3.32倍、2.29倍和2.03倍。最后的内吞实验显示四种纳米抗体均能被PSMA阳性肿瘤细胞高效摄取,30 min内的摄取率均在80%以上。结论:靶向PSMA的多价纳米抗体,尤其是二价纳米抗体,具有比单价纳米抗体更高的产量和亲和水平,且具备不亚于单价纳米抗体的内吞效率,是未来基于PSMA肿瘤诊疗试剂开发的重要候选。     

细胞表面聚糖标记研究进展

细胞表面聚糖与细胞的多种生理过程密切相关,是目前生命科学研究的热点之一.聚糖的糖链结构十分复杂,其合成没有直接的基因模板,且糖类化合物难以标记和检测,这些原因导致聚糖的研究面临着巨大的挑战.近年来,基于代谢糖工程和化学酶法聚糖标记策略的迅速发展,为糖生物学研究提供了重要的聚糖标记手段.这两种策略分别通过代谢糖工程和化学酶法将具有化学报告基团的非天然糖类似物标记在聚糖结构上,并通过生物正交反应对这些聚糖结构进行研究.本文主要总结了两种策略近几年的进展,分析了两种方法各自的优缺点,并探讨了两种策略在糖生物学研究中的应用和未来发展的潜力.