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1.
采用RT-PCR技术获得了拟南芥多聚ADP核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]PARP1基因的全长cDNA,转入原核表达载体pET32a并转化宿主菌Origami(DE3),加入终浓度为0.3mmol/L IPTG,在16℃下诱导可获得较多的可溶重组蛋白。纯化TRX-PARP1,在反应液中加入NAD+和断裂DNA,通过SDS-PAGE凝胶电泳和Western blotting分析,TRX-PARP1分子量可随着时间的延长逐渐增大,产生向上的弥散,表明蛋白质连上了ADP核糖分子;与此对比,作为参照的标签蛋白TRX无此现象。实验结果显示原核表达拟南芥PARP1能够催化自身多聚ADP核糖化修饰,为深入研究植物多聚ADP核糖聚合酶的功能奠定了基础。  相似文献   
2.
摘要 目的:肾癌早期无明显症状,且无血清诊断标志物,晚期缺乏有效治疗手段。外泌体的生物学功能及现有研究报道为早期肾癌的诊断提供了新的理论基础和新思路,本文旨在尝试在肾癌血清外泌体中寻找肾癌诊断标志物以有助于提高肾癌的诊断水平,减少肾癌死亡率。方法:取肾癌肿瘤组和对照组各10个样本,用试剂盒(PEG法)分离外泌体,提取RNA后建库测序,数据处理后以|log2(fold change) |>1和显著水平q_value<0.001为标准筛选得一组显著差异基因,设计引物探针后大样本qPCR验证,对数据进行统计并作t检验分析,通过LASSO回归建立诊断模型,ROC-AUC判断诊断价值。结果:RNA-seq并深度分析筛出PFN2 RAB4B PHEX DACH1 Linc01765五个基因,运用LASSO回归建立了早期肾癌诊断模型,计算ROC-AUC值是0.818。结论:在肾癌血清外泌体中筛到一组基因,通过LASSO回归建立早期肾癌诊断模型,ROC-AUC值达0.818,具有一定的临床应用价值。  相似文献   
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