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选取已稳定转染HBV X基因的QSG7701细胞(pCMVX/QSG7701),并以稳定转染空质粒pRc/CMV2的QSG7701细胞(pRcCMV2/QSG7701)及未转染的QSG7701细胞为对照,用免疫荧光方法检测pCMV X/QSG7701细胞中HBX蛋白的分布;用RT-PCR方法和免疫细胞化学法分别检测细胞中c-Myc表达:用光镜及电镜观察细胞形态学变化,进一步研究乙肝病毒(HBV) X基因对永生化非瘤性人肝细胞QSG7701的转化作用.研究发现,乙肝病毒X(HBX)蛋白主要分布在细胞膜及细胞浆;c-Myc mRNA及c-Myc蛋白在3种细胞中均有表达,但转染了X基因的细胞中c-Myc的表达水平较其他两组明显升高(p<0.Ol);光镜和电镜下观察发现pCMV X/QSG细胞的胞核较大,核膜增厚,核仁肥大且增多,核/浆比例失调.可见少量多核巨细胞,pRc-CMV2/QSG7701细胞与QSG7701细胞核浆比正常,染色质分布均匀,胞核大小及形态正常.结果表明.HBVX基因成功转染了QSG7701细胞,HBV X蛋白主要分布于转染细胞的细胞膜和细胞浆中.HBX可能通过上调转染细胞中c-Myc蛋白的表达而使细胞具备恶性化生长的倾向. 相似文献
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乙肝病毒X基因真核表达质粒及细胞模型的建立 总被引:1,自引:1,他引:0
采用聚合酶链反应(PCR)方法扩增HBVX基因,定向亚克隆入真核表达载体pRc/CMV2.构建重组质粒pCMV/X;采用脂质体法转染QSG7701细胞,筛选阳性细胞克隆;RT—PCR法检测HBV XmRNA的表达情况.Western blotting法鉴定HBx蛋白的表达,结果表明,构建的真核重组表达质粒pCMV/X中包含有完整的HBVX基因片断,pCMV/工转染的QSG7701细胞中有HBVXmRNA及HBx蛋白的稳定表达.成功建立了HBVX稳定转染的细胞系,为进一步探讨HBx在HCC的发生发展过程中所起的作用,提供了一个有价值的细胞模型. 相似文献
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