DHPLC检测胃癌微卫星不稳定性

为探讨一种快速、简便、可靠的胃癌微卫星不稳定性（MSI）检测方法,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染法检测28例胃癌12个微卫星位点(D1S548、D1S552、D5S346、TP53、IGFIIR(G)8、IGFIIR(CT)5、TGFßRII(GT)3、TGFßRII(A)10、hMSH3(A)8、hMSH6(G)8、BAX(G)8和Bat26）,DHPLC柱温50℃检测Bat26位点。凝胶电泳发现MSI-H 2例（7.14%）,MSI-L胃癌15例（53.6%）,Bat26+2例均为MSI-H,Bat26改变和MSI-H表型一致（P<0.01,Fisher’s确切概率法）。DHPLC亦证实2例Bat26+胃癌,结果和凝胶电泳完全一致。结果表明,DHPLC检测Bat26位点是研究胃癌MSI-H的较好方法,有一定的临床应用价值。Abstact: To establish a fast, simple and solid method of studying microsatellite instability (MSI) in gastric cancer, a panel of 12 microsatellite sites,D1S548, D1S552, D5S346, TP53, IGFIIR(G)8, IGFIIR(CT)5, TGFßRII(GT)3, TGFßRII(A)10, hMSH3(A)8, hMSH6(G)8, BAX(G)8 and Bat26, were detected by denatured polyacrymide gel electrophoresis-silver stain in 28 gastric cancers. Bat26 was also analyzed by denatured high performance liquid chromatograph (DHPLC) at 50℃ in the DNASep Cartridge. Two MSI-H (7.14%) and 15 MSI-L cancers (53.6%) were identified in 28 gastric cancers. Bat26 was positive only in 2 MSI-H cancers. The alterations of Bat26 and MSI-H status were coincident (P<0.01). The two Bat26+ cancers were also confirmed by DHPLC. Results obtained from DHPLC and gel electrophoresis were completely consistent. Thus, DHPLC analysis of Bat26 site may be a favorable method of detecting MSI-H status in gastric cancer, and be of clinical importance.     

应用CGH数据和树模型探索癌症的发病机理

比较基因组杂交技术(comparative genomic hybridization, CGH)主要用于检测肿瘤的染色体缺失和扩嘱, 迄今已积累了大量的实验数据, 为全基因组分析肿瘤的发生机制提供了可能。树模型在生物信息学领域通常被用于研究生物形成和进化的历史, 物种之间的进化关系常以系统发生树来表示。树模型同样可以作为一种有力的生物信息学工具来分析CGH数据, 探索癌症的发病机理。文中介绍了两种常见的树模型—— 分支树和距离树, 详细叙述了重建树模型的基本原理和方法, 分析了创建树模型时要注意的几个技术问题, 并对其在肿瘤研究中的应用进行了回顾和总结。肿瘤的树状模型作为单路径线性模型的泛化, 克服了以往单路径线性模型的缺点, 理论上能更加精确地概括到肿脉的多基因、多路径、多阶段的发生发展模式, 从不同角度探讨肿瘤发生发展的分子机制。该模型除可用于分析肿瘤的CGH数据外, 还可用于分析其他多种类型的数据, 包括微阵列CGH(array-CGH)技术等产生的高分辨率数据。     

结肠腺瘤-正常文库的生物信息学分析

为进一步分析腺瘤相对正常SSH文库（A－N）的差异表达候选基因的表达谱,结合通用的生物信息学软件,自行开发、搭建包括核酸自动分析平台及GetUNi软件包的生物信息学平台,实现了将A-N文库109个差异克隆序列与本地下载的非冗余核酸数据库、人UniGene数据库比对、聚类,至获取差异表达候选基因的自动化分析。对这些基因进行GOTM（GOTree Machine)初步生物信息学分析及RT-PCR验证。结果共发现62个候选基因,包括6个核糖体蛋白成员,6个免疫相关基因。Reg4和FAM46A两个基因出现频次最高,分别为13次和4次,半定量RT－PCR显示这两个基因分别在10/10和9/10例腺瘤相对正常黏膜表达上调。对于这些差异表达候选基因的进一步分析和研究将有助于揭示结肠腺瘤发生的分子机制。