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水稻矮缩病毒（RDV）的基因组包含12条双链RNA,其中基因组片段S6编码的非结构蛋白Pns6为该病毒的运动蛋白.在本研究中,在大肠杆菌中表达了N端融合His-tag的重组Pns6蛋白.在低温和低IPTG浓度的诱导后,通过Ni螯合亲和层析进行纯化获得了HisPns6蛋白.稳定性分析表明,HisPns6是一个稳定的蛋白,可耐受37℃下长达24h的处理.纯化的蛋白后续用于单克隆抗体的制备并得到18个杂交瘤细胞株系.使用从感染RDV的水稻叶片中提取的Pns6为样品,以健康水稻总蛋白为对照,通过Western blot法对抗体进行特异性分析,获得了15个阳性抗体.对其进行抗原决定簇分析表明,最敏感的抗原决定簇位于Pns6的C端区域（296~509位氨基酸）.该结果与生物信息学预测分析相吻合. 相似文献
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PPF1基因C端片段在大肠杆菌中的融合表达和纯化以及抗体制备 总被引：4，自引：0，他引：4
PPF1是与G2豌豆短日不衰老现象紧密相关的基因之一 .以pSK PPF1为模板 ,用PCR方法得到了编码该蛋白C端的基因片段 ,称为PPFC .进一步将该基因片段克隆到中间载体pGEM T easy ,再酶切得到PPFC片段插入到pGEX 4T 1载体中 ,构建成表达质粒pGEX 4T PPFC .在BL2 1细胞中经IPTG诱导表达 ,得到GST PPFC融合蛋白 .用GST亲和柱纯化得到PPFC蛋白 ,将其作为抗原得到兔源的多克隆抗体 .Western杂交分析表明所得到的抗体具有较强的特异性 ,ELISA分析证实其效价为 10 6.该抗体的获得为用免疫沉淀等免疫分析技术研究PPF1与其它蛋白质的相互作用 ,从而阐明PPF1在延缓G2豌豆衰老中的分子机制提供了可能 相似文献
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