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用于胚胎干细胞分离培养的滋养层细胞株的建立 总被引:2,自引:0,他引:2
具有发育全能性的胚干细胞在分离培养时必须依赖滋养层细胞~[1],本研究旨在建议一个可供使用的滋养层细胞株。将小鼠胎仔去头、内脏、四肢后用胰酶消化,用作成纤维细胞的初代培养,2~36后继代培养,并开始进行选择和株化,获得的继代培养的成纤维细胞可用于制备胚干细胞培养所需滋养层,亦可冷冻保存备用。本实验所建立的小鼠成纤维细胞系,已成功地用于胚干细胞的分离培养,证明可作为分离培养胚干细胞时所需的滋养层细胞来源。 相似文献
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姐妹染色单体交换(SCE)测定,由于操作简单,观察客观,又具有高度的敏感性,因此是近年来颇受重视的一项细胞遗传学手段。并且已广泛应用于遗传学、临床医学及环境科学等方面的研究。下面我们就本实验室采用碱性磷酸缓冲液加吉姆萨染色,能使已标记上BudR染色体的两条单体很好地区别染色的技术简单介绍如下: 一、BudR标记:在细胞培养液中加10—20微克/毫升的5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BudR的用量必须视细胞株的特性在此范围内调整),黑暗条件下培养两个细胞周期,然后按常规收获细胞,制作染色体标本。 二、区别染色:制备好的染色体标本(至少要在室温下放置一天)直接用新配的0.3M磷酸氢二钠(用1N氢氧化钠调pH至10左右,pH<9染色体的两条单体不能区别染色)配制3%吉姆萨溶液,染色10分钟,自来水冲洗,干燥镜检。 相似文献
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本文用小鼠NS—1骨髓瘤细胞与小鼠脾淋巴细胞经PEG介导进行融合,通过HAT选择,有成效地获得了同种杂种细胞。在融合后第30、50、70、90天观察了杂种细胞的染色体畸变和间期细胞核损伤,并对亲本和杂种细胞的染色体核型、带型(G带、C带)进行了比较。 结果表明:NS—1细胞系的染色体平均数为64.2条,有一条标记性的亚中着丝粒染色体及一条微小染色体。小鼠脾淋巴细胞染色体为2n=40,全部为端着丝粒染色体。NS—1/小鼠脾淋巴细胞融合后的杂种细胞,染色体平均数随融合后杂种的传代而逐渐减少。到第70天时已稳定,平均为80.7±6.2条。同时,随融合后传代,杂种细胞染色体畸变率和核碎裂也增加。 最后对染色体丢失的机理及意义以及饲养细胞在融合中的作用进行了初步讨论。 相似文献
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